培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類(lèi)；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí),。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱,，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

產(chǎn)品屬性：

名稱(chēng)    小鼠輸尿管上皮細(xì)胞
2.組織來(lái)源：尿道組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠輸尿管上皮細(xì)胞分離自輸尿管組織,；輸尿管上接腎盂,，下連膀胱，是一對(duì)細(xì)長(zhǎng)的管道,，呈扁圓柱狀,，位于腹膜后，為一肌肉粘膜所組成管狀結(jié)構(gòu),，沿腰大肌內(nèi)側(cè)的前方垂直下降進(jìn)入骨盆,。輸尿管有三個(gè)狹窄部：一個(gè)在腎盂與輸尿管移行處（輸尿管起始處）；一個(gè)在越過(guò)小骨盆入口處,；后一個(gè)在進(jìn)入膀胱壁的內(nèi)部,。這些狹窄是結(jié)石、及壞死組織容易停留的部位,。輸尿管——膀胱連接處有一種特殊結(jié)構(gòu),，即瓦耳代爾鞘，它能有效地防止膀胱內(nèi)尿液返流到輸尿管,。臨床上將輸尿管分為上,、中,、下三段，也可稱(chēng)為腹段,、盆段,、膀胱段。其中,，腹段自腎盂輸尿管交界處，到跨越髂動(dòng)脈處,；盆段,，自髂動(dòng)脈到膀胱壁；膀胱段,，自膀胱壁內(nèi)斜行至膀胱粘膜,、輸尿管開(kāi)口。輸尿管管壁分為4層,，黏膜層,、固有層、肌層,、外膜,。黏膜層表面為移行上皮，約有4-5層細(xì)胞,；固有層由細(xì)密的結(jié)締組織構(gòu)成,，內(nèi)含膠原纖維和少量彈性纖維；輸尿管肌層主要由內(nèi)縱和外環(huán)兩層平滑肌組成,；外膜為疏松結(jié)締組織,，營(yíng)養(yǎng)血管由外膜進(jìn)入輸尿管。其中,，輸尿管上皮細(xì)胞主要分布于黏膜層,。

5.方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠輸尿管上皮細(xì)胞采用先消化、然后機(jī)械分離法使輸尿管分層,、后膠原酶消化,，并通過(guò)上皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠輸尿管上皮細(xì)胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1,、無(wú)菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
枯草芽孢桿菌CMCC63501凍干粉   靈芝(紅芝,，赤芝)

卡爾斯伯酵母   雙氮纖維單胞菌 Cellulomonas biazotea

銅綠假單胞菌   近平滑假絲酵母 Candida parapsilosis

素鏈霉菌   乳鏈球菌 Lactococcus lactis

白色念珠菌凍干粉   蘇云金芽胞桿菌蘇云金變種 Bacillus thuringeinsis subsp. thuringeinsis
大鼠尿微量白蛋白(MAU/ALB)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠尿素酶相關(guān)蛋白C(UreC)elisa檢測(cè)試劑盒

酶型纖溶酶原激活因子(uPA)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠型纖溶酶原激活物(uPA)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠輸尿管上皮細(xì)胞人Seryl- tRNA合成酶，細(xì)胞質(zhì)(SARS/SERS)elisa分析檢測(cè)試劑盒

人Seryl- tRNA合成酶,，細(xì)胞質(zhì)(SARS/SERS)elisa檢測(cè)試劑盒

人SH2攜帶蛋白(SHC/SLP-76)elisa分析檢測(cè)試劑盒

人SH2攜帶蛋白(SHC/SLP-76)elisa檢測(cè)試劑盒

人SHC轉(zhuǎn)化蛋白1(SHC1)elisa分析檢測(cè)試劑盒

冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。