冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。

產(chǎn)品屬性：

名稱    心肌成纖維細(xì)胞
2.組織來源：心臟組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

人心肌成纖維細(xì)胞分離自心臟組織；心臟由心肌細(xì)胞和非心肌細(xì)胞組成,，非心肌細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的70%,，其中90%以上的非心肌細(xì)胞由心肌成纖維細(xì)胞組成。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來,。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛,，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下,，它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的心肌成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細(xì)胞基本貼壁*,，伸展成梭形，胞核清晰,，分布較均勻,，散在生長，不聚集成團,；細(xì)胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密,，有的交叉重疊生長,，平坦、胞體較大,，細(xì)胞質(zhì)透明,，細(xì)胞核較大，呈橢圓形,，顏色淡,。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。近年來，人們逐漸了解到非心肌細(xì)胞不僅對心肌細(xì)胞具有結(jié)構(gòu)上的支持,、保護作用,，而且還具有自分泌和旁分泌功能，影響心肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和生理功能；心肌成纖維細(xì)胞主要功能為對心肌細(xì)胞起結(jié)構(gòu)支持作用并負(fù)責(zé)細(xì)胞基質(zhì)外的合成,，當(dāng)心肌損傷時能產(chǎn)生旁分泌生長因子,。心肌成纖維細(xì)胞是心臟結(jié)締組織中常見的細(xì)胞，可合成和分泌膠原纖維,、彈性纖維,、網(wǎng)狀纖維及有機基質(zhì)，并且在外傷等因素刺激下,，部分纖維細(xì)胞可重新轉(zhuǎn)變?yōu)橛字傻某衫w維細(xì)胞,，其功能活動也得以恢復(fù)，參與組織損傷后的修復(fù),。因此,，對心肌成纖維細(xì)胞的生理學(xué)研究成為現(xiàn)代心血管領(lǐng)域研究的一個重點。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的人心肌成纖維細(xì)胞采用膠原酶-聯(lián)合消化結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的人心肌成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
蠟狀芽孢桿菌蕈狀變種   草菇

三寶壟根霉   園弧青霉=桔灰青霉

血瓊脂平板(BAP)[血平板]90mm   不動桿菌

副溶血性弧菌   蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種

人蒼白桿菌   谷酸棒狀桿菌
大鼠前列腺素E1（PGE1）elisa檢測試劑盒

大鼠前列腺素E2PGE2 elisa檢測試劑盒

大鼠羥（HYP）elisa檢測試劑盒

大鼠（NE）elisa檢測試劑盒

大鼠（NE）elisa檢測試劑盒
心肌成纖維細(xì)胞人α/β干擾素受體(IFN-α/βR)elisa檢測試劑盒免費代測

人α1β糖蛋白(α1β-GP)elisa分析檢測試劑盒

人α1β糖蛋白(α1β-GP)elisa檢測試劑盒

人α1防御素(DEFA1)elisa分析檢測試劑盒

人α1防御素(DEFA1)elisa檢測試劑盒
實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。