產(chǎn)品屬性：

名稱    小鼠皮膚肥大細胞
2.組織來源：皮膚組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

小鼠皮膚肥大細胞分離自皮膚組織；皮膚肥大細胞廣泛分布于皮膚微血管周圍,，分泌多種細胞因子,，參與免疫調(diào)節(jié)（T細胞,、B細胞、APC細胞活化）,。皮膚肥大細胞表達MHC分子,、B7分子，具有APC功能,。表達大量的IgE-Fc受體,，釋放過敏介質(zhì)。具有弱吞噬功能,，和血液的嗜堿粒細胞同樣,，具有強嗜堿性顆粒的組織細胞。存在于血液中的這類顆粒,，含有肝素,、組織胺、5-羥色胺,，由細胞崩解釋放出顆粒以及顆粒中的物質(zhì),，可在組織內(nèi)引起速發(fā)型過敏反應(yīng)（炎癥）。由于在肥大細胞上結(jié)合的IgE抗體和抗原的接觸,，使細胞多陷于崩壞,。肥大細胞呈圓形或卵圓形，細胞核小,，呈圓形或橢圓形,，染色淺，位于細胞中央,。細胞常成堆或單個分布于血管附近,。細胞呈圓形或卵圓形，細胞質(zhì)中充滿大小一致,、染成藍紫色的顆粒,，均勻分布在核周圍。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠皮膚肥大細胞采用膠原酶-混合消化法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的小鼠皮膚肥大細胞經(jīng)MCG-35免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態(tài) 圓形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%,，細胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
亮白曲霉   北京棒桿菌

腸炎沙門氏菌腸炎亞種   粉狀畢赤酵母

玫瑰色鏈霉菌   保加利亞乳桿菌

大腸埃希菌凍干粉   耐久腸球菌(堅韌鏈球菌)

陰溝腸桿菌   小被孢霉
大鼠上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)elisa檢測試劑盒

大鼠色胺酸羥化酶2(TPH2)elisa檢測試劑盒

大鼠色胺酸羥化酶1(TPH1)elisa檢測試劑盒

大鼠三葉因子3(TFF3)elisa檢測試劑盒

大鼠三葉因子2(TFF2)elisa檢測試劑盒
小鼠皮膚肥大細胞人β-轉(zhuǎn)導(dǎo)素重復(fù)序列包含蛋白(BTRC)elisa檢測試劑盒

人γ氨基丁酸(GABA)elisa分析檢測試劑盒

人γ氨基丁酸(GABA)elisa檢測試劑盒

人γ-氨基丁酸（GABA）elisa檢測試劑盒

人γ分泌酶elisa分析檢測試劑盒