培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱,，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

產(chǎn)品屬性：

名稱    腹膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞
2.組織來源：腹膜組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

人腹膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自腹膜組織,；腹膜是存在于高等脊椎動(dòng)物腹腔中的一層黏膜,，主要由間皮細(xì)胞和間質(zhì)（結(jié)締組織、纖維,、毛細(xì)血管,、淋巴管）構(gòu)成，藉由結(jié)締組織的支持所形成的一層膜狀組織,。腹膜包覆大部分腹腔內(nèi)的器官,，能分泌黏液潤濕臟器的表面，減輕臟器間的摩擦,。腹腔臟器的血液,、淋巴和神經(jīng)組織經(jīng)由腹膜與外界相連；腹膜也具有吸收撞擊保護(hù)內(nèi)臟的效果,。腹膜（peritoneum）為全身面積大,、配布復(fù)雜的漿膜，由皮及少量結(jié)締組織構(gòu)成,，薄而光滑,，呈半透明狀。襯于腹,、盆腔壁內(nèi)表面的腹膜稱為壁腹膜（parietal-peritoneum）或腹壁薄層,；覆蓋腹、盆腔器表面的部分稱為臟腹膜（visceral-peritoneum）腹膜或腹膜臟層,。臟腹膜與壁腹膜互相延續(xù),、移行，共同圍成不規(guī)則的潛在性腔隙,，稱為腹膜腔（peritoneal-cavity）,。腹膜腔是臟、壁兩層腹膜之間相互移行圍成的潛在性間隙,。腹膜腔內(nèi)有少量漿液,，在臟器活動(dòng)時(shí)可減少摩擦。腹膜的主要生理功能：①分泌功能,；②吸收功能,；③再生能力；④防御功能,；⑤調(diào)理功能,。臟、壁腹膜都有豐富的毛細(xì)血管,，毛細(xì)血管上有不同的孔徑,；腹膜的毛細(xì)血管和毛細(xì)血管后靜脈是進(jìn)行溶質(zhì)交換的主要場所。

5.方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腹膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶-聯(lián)合消化法結(jié)合化學(xué)試劑抑制法,、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腹膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
痢疾志賀氏菌   甘薯長喙殼 Ceratocystis fimbriata

科恩根霉   球毛殼菌 Chaetomium globosum

貝雷絲孢酵母   纖維纖維微菌

居海洛克氏菌   固囊酵母

0.1%蛋白胨水溶液200ml   潔麗香菇豹皮菇
大鼠軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)

大鼠乳腺癌標(biāo)志物-CA153elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-Ⅰ(CPT1)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠肉堿elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
腹膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞人β葡萄糖醛酸苷酶(βGD)elisa分析檢測(cè)試劑盒

人β葡萄糖醛酸苷酶(βGD)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)

人β羥丁酸(β-OHB)elisa分析檢測(cè)試劑盒

人β羥丁酸(β-OHB)elisa檢測(cè)試劑盒

人β乳糖蛋白抗體IgG elisa分析檢測(cè)試劑盒

冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí),， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。