冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品屬性：

名稱    大鼠皮層神經(jīng)元細胞
2.組織來源：腦組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

大鼠皮層神經(jīng)元細胞分離自腦皮層組織,；皮層神經(jīng)元細胞是構成中樞神經(jīng)系統(tǒng)結構和功能的基本單位,。神經(jīng)元是具有長突觸(軸突)的細胞，它由細胞體和細胞突起構成,。在長的軸突上套有一層鞘,，組成神經(jīng)纖維，它的末端的細小分支叫做神經(jīng)末梢,。細胞體位于腦,、脊髓和神經(jīng)節(jié)中，細胞突起可延伸至全身各器官和組織中,。細胞體是細胞含核的部分,，其形狀大小有很大差別，直徑約4-120微米。核大而圓,，位于細胞中央,，染色質少，核仁明顯,。細胞質內(nèi)有斑塊狀的核外染色質,，還有許多神經(jīng)元纖維。細胞突起是由細胞體延伸出來的細長部分,，又可分為樹突和軸突,。每個神經(jīng)元可以有一或多個樹突，可以接受刺激并將興奮傳入細胞體,。每個神經(jīng)元只有一個軸突,，可以把興奮從胞體傳送到另一個神經(jīng)元或其他組織，如肌肉或腺體,。皮質神經(jīng)元是大腦皮質的主要組成細胞之一,，是大腦進行功能活動調節(jié)的基本單位，參與動物多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理過程,。通過形態(tài)學觀察顯示神經(jīng)元從貼壁,、伸出突起開始；突起逐漸增多,，而后突起進一步增多并逐漸成網(wǎng),，同時細胞胞體增大，周邊光暈明顯,。10-12d細胞為豐滿,，隨后神經(jīng)元開始裂解，突起逐漸減少,，細胞已退化變性,，輪廓模糊，光暈消失,，細胞變形,。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠皮層神經(jīng)元細胞采用消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結合化學試劑抑制法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠皮層神經(jīng)元細胞經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27 Supplement,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 神經(jīng)元細胞樣

傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%,，細胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
硫酸葡聚糖1g  即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒300 次

聚乙二醇100g  即用型熒光定量 PCR 試劑盒600 次

酪蛋白50g  即用型熒光定量 PCR 試劑盒100 次

脫脂奶粉 ( 雜交專用 )50g  即用型易錯 PCR 試劑盒100 次

即用型封堵液 (NC 專用 ) 50mL  即用型熱啟動 PCR 試劑盒1.5mL
大鼠髓過氧化物酶(MPO)elisa檢測試劑盒

大鼠酸性磷酸酶(ACP)elisa檢測試劑盒

大鼠酸性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)elisa檢測試劑盒

大鼠酸性成纖維細胞生長因子(aFGF/FGF-1)elisa檢測試劑盒

大鼠酸性β葡萄糖苷酶(GBA)elisa檢測試劑盒
大鼠皮層神經(jīng)元細胞人白介素8(IL-8/CXCL8)elisa分析檢測試劑盒

人白介素8(IL-8/CXCL8)elisa檢測試劑盒

人白介素8(IL-8/CXCL8)自身抗體elisa分析檢測試劑盒

人白介素8(IL-8/CXCL8)自身抗體elisa檢測試劑盒

人白介素增強子結合因子2(ILF2/NF45/PRO3063)elisa分析檢測試劑盒
實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。