培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱,，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

產(chǎn)品屬性：

名稱    皮膚肥大細(xì)胞
2.組織來源：皮膚組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人皮膚肥大細(xì)胞分離自皮膚組織,；皮膚肥大細(xì)胞廣泛分布于皮膚微血管周圍，分泌多種細(xì)胞因子,，參與免疫調(diào)節(jié)（T細(xì)胞,、B細(xì)胞、APC細(xì)胞活化）,。皮膚肥大細(xì)胞表達(dá)MHC分子,、B7分子，具有APC功能,。表達(dá)大量的IgE-Fc受體,，釋放過敏介質(zhì)。具有弱吞噬功能,，和血液的嗜堿粒細(xì)胞同樣,，具有強(qiáng)嗜堿性顆粒的組織細(xì)胞。存在于血液中的這類顆粒,，含有肝素,、組織胺、5-羥色胺,，由細(xì)胞崩解釋放出顆粒以及顆粒中的物質(zhì),，可在組織內(nèi)引起速發(fā)型過敏反應(yīng)（炎癥）。由于在肥大細(xì)胞上結(jié)合的IgE抗體和抗原的接觸,，使細(xì)胞多陷于崩壞,。肥大細(xì)胞呈圓形或卵圓形，細(xì)胞核小,，呈圓形或橢圓形,，染色淺,，位于細(xì)胞中央。細(xì)胞常成堆或單個(gè)分布于血管附近,。細(xì)胞呈圓形或卵圓形,，細(xì)胞質(zhì)中充滿大小一致、染成藍(lán)紫色的顆粒,，均勻分布在核周圍,。

5.方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人皮膚肥大細(xì)胞采用膠原酶-混合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人皮膚肥大細(xì)胞經(jīng)MCG-35免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形,、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
硫乙醇酸鹽平板培養(yǎng)基70mm   熏衣草灰鏈霉菌

弗氏檸檬酸桿菌   木糖氧化產(chǎn)堿菌木糖氧化亞種

豇豆慢生根瘤菌   膠紅酵母

新月彎孢霉   粉狀畢赤酵母

糞腸球菌   熒光假單胞菌  無機(jī)0細(xì)菌
大鼠天門冬氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)

大鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠糖原磷酸化酶(GP)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠糖原合成酶激酶3α(GSK3A)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
皮膚肥大細(xì)胞人表達(dá)于SiSo細(xì)胞系的受體結(jié)合型腫瘤抗原(RCAS1)elisa分析檢測(cè)試劑盒

人表達(dá)于SiSo細(xì)胞系的受體結(jié)合型腫瘤抗原(RCAS1)elisa檢測(cè)試劑盒

人表睪酮elisa分析檢測(cè)試劑盒

人表睪酮elisa檢測(cè)試劑盒

人表皮生長因子(EGF)elisa分析檢測(cè)試劑盒

冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí),， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。