名稱    小鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞
2.組織來源：視網(wǎng)膜組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

小鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞分離自視網(wǎng)膜組織,；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層,，是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開,，稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連,，由色素上皮細胞組成,，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細胞、遮光,、散熱以及再生和修復(fù)等作用,。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層,、視錐,、視桿細胞層、外界膜,、外顆粒層,、外叢狀層、內(nèi)顆粒層,、內(nèi)叢狀層,、神經(jīng)節(jié)細胞層、神經(jīng)纖維層,、內(nèi)界膜,。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜，有感光作用,；后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)乳頭,。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個神經(jīng)元組成,。第一神經(jīng)元是視細胞層，專司感光,，它包括錐細胞和桿細胞,。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網(wǎng)膜上，而視錐細胞則在中心凹處多,。第二層叫雙節(jié)細胞,，約有10到數(shù)百個視細胞通過雙節(jié)細胞與一個神經(jīng)節(jié)細胞相聯(lián)系，負責(zé)聯(lián)絡(luò)作用,。第三層叫節(jié)細胞層,，專管傳導(dǎo)。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu),，它貼于眼球的后壁部,，傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面，經(jīng)由視神經(jīng)到達出口,。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的,，在黃斑區(qū)，其分辨能力強,。它是組成血管腔面單層扁平上皮樣細胞,，它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓,、抗血栓形成等有重要作用,，在視網(wǎng)膜血管疾病的發(fā)病機制中有重要病理生理學(xué)意義。由于從不同的組織和器官獲得的內(nèi)皮細胞具有不同的特性,，在腦和視網(wǎng)膜中,，這些內(nèi)皮細胞具有內(nèi)屏障的功能，在調(diào)節(jié)血管生理狀態(tài),，釋放血管活性物質(zhì)以及新生血管的形成中發(fā)揮著重要作用,，體外分離培養(yǎng)RCEC對研究視網(wǎng)膜血管性疾病發(fā)生發(fā)展的病理生理機制以及疾病的早期防治具有重要臨床意義。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞采用膠原酶-混合消化法結(jié)合密度梯度離心法,、后通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的小鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
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細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,，根據(jù)要求可始終保持細胞活力,，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,，包括活細胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu)、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,，同時,，可以施加化學(xué)、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,，需要時,，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設(shè)備。

使用方法：
收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒,，拆下封口膜,，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右,；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化,；
3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,，放入37℃,，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO,，貨號21875-091),，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,，液氮儲存,。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞,，1000RPM,，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

露濕漆斑菌   宇佐美曲霉  產(chǎn)果膠酶,、，檸檬酸深層培養(yǎng)菌

0.5%葡萄糖肉湯100ml   宇佐美曲霉  用于酒精,、白酒等的糖化菌

隱甲藻   宇佐美曲霉  產(chǎn)生酸性蛋白酶

蘇云金芽胞桿菌莫氏變種 Bacillus thuringiensis var. merrisoni   奇異變形桿菌ATCC35659凍干粉

謝瓦曲霉   單增李斯特菌
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