冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品屬性：

名稱    小鼠嗅鞘細胞
2.組織來源：嗅球組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

小鼠嗅鞘細胞分離自嗅球組織,；嗅鞘細胞（OECs）是在功能上介于施旺細胞和少突膠質(zhì)細胞之間的一種特殊的膠質(zhì)細胞,，具有神經(jīng)營養(yǎng)、抑制膠質(zhì)增生,、瘢痕形成,、成鞘作用等；為軸突生長提供了適宜的微環(huán)境及較強的遷移的特性,，使其成為促進中樞神經(jīng)再生的理想候選細胞之一,。嗅鞘細胞是目前所發(fā)現(xiàn)的極少數(shù)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)可以再生細胞之一，其特點為終身具有神經(jīng)再生功能,，還能夠釋放多種神經(jīng)營養(yǎng)因子,、神經(jīng)粘附分子。被認(rèn)為是髓鞘化能力強的膠質(zhì)細胞,，逐漸用于治療脊髓損傷,。嗅鞘細胞與膠質(zhì)細胞、雪旺細胞在表現(xiàn)型上有共同點,，它們都能促進軸突的再生,，主要區(qū)別在于嗅鞘細胞不但存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，也存在于外周神經(jīng)中,。嗅鞘細胞被認(rèn)為是一種可塑性很高的細胞,，它可表現(xiàn)出多種細胞形態(tài)和細胞表面標(biāo)志，在嗅系統(tǒng)發(fā)育過程中,，嗅鞘細胞根據(jù)其在組織定位的不同而有不同的抗原表型,，其中P75NTR、GFAP,、和O4可標(biāo)記大部分在體嗅鞘細胞,，然而在嗅球外神經(jīng)層O4陽性嗅鞘細胞仍然可以在P75NTR陽性細胞層內(nèi)分化成E-NCAM陽性的細胞層,，還有一定比率的嗅鞘細胞P75NTR陰性而NY和S100表型為陽性。嗅黏膜中的神經(jīng)元是生后才生長并在成年時繼續(xù)分化的神經(jīng)元,，壽命為4-12周,，隨著新細胞的生長，又建立了新的神經(jīng)支配關(guān)系,。嗅鞘細胞存在于嗅神經(jīng)及嗅球的神經(jīng)層上,，沿嗅神經(jīng)的全長，從周圍神經(jīng)系統(tǒng)到中樞神經(jīng)分布,。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠嗅鞘細胞采用-膠原酶聯(lián)合消化法,、結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的小鼠嗅鞘細胞經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 神經(jīng)元細胞樣

傳代特性 屬于終末分化細胞,；屬于不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細胞,，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%,，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,，注意凍 存管做好標(biāo)識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。
路德類酵母   黃綠綠僵菌

黑曲霉菌凍干粉   棒曲霉

類芽孢桿菌   貝形側(cè)耳,、鷹翅菌

陰溝腸桿菌（陰溝腸桿菌陰溝亞種）   缺陷短波單胞菌

大禿馬勃   長根菇
大鼠晚期糖基化端產(chǎn)物特異受體(AGER)elisa檢測試劑盒

大鼠蛙皮素,雨蛙肽elisa檢測試劑盒

大鼠脫氧膠原吡啶交聯(lián)(DPD)elisa檢測試劑盒

大鼠脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S)elisa檢測試劑盒免費代測

大鼠脫氫表雄酮(DHEA)elisa檢測試劑盒
小鼠嗅鞘細胞人補體1抑制物抗體-IgG(C1INH-IgG)elisa檢測試劑盒

人補體1抑制物抗體-IgM(C1INH-IgM)elisa分析檢測試劑盒

人補體1抑制物抗體-IgM(C1INH-IgM)elisa檢測試劑盒免費代測

人補體3裂解產(chǎn)物(C3SP)elisa分析檢測試劑盒

人補體3裂解產(chǎn)物(C3SP)elisa檢測試劑盒
實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。