冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。

產(chǎn)品屬性：

名稱    AsPC-1 (轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細胞) (STR鑒定正確)
別稱 AsPc-1; Aspc-1; ASPC-1; As-PC1; ASPC1; AsPC1; Aspc1; AsPc1

種屬 人類

年齡（性別） 62歲

組織來源 胰腺,；轉(zhuǎn)移灶；腹水腺癌

生長特性 貼壁細胞

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

背景描述 AsPC-1細胞來源于人胰腺癌病人腹水中的細胞裸鼠異種移植而產(chǎn)生的癌性腹水細胞,；AsPC-1細胞可以表達CEA,、人胰腺相關(guān)抗原、人胰腺特異性抗原和黏蛋白,。

生物安全等級 1

生長培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

倍增時間 ~38-48小時

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

溫度：37℃

基因表達情況 carcinoembryonic antigen (CEA); human pancreas associated antigen; human pancreas specific antigen; mucin

保藏機構(gòu) ATCC; CRL-1682 BCRC; 60494 ECACC; 96020930

培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%,，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,，注意凍 存管做好標(biāo)識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
1號染色體開放閱讀框19抗體

1號染色體開放閱讀框25抗體

1號染色體開放閱讀框31抗體

1號染色體開放閱讀框51抗體

1號染色體開放閱讀框52抗體
大鼠神經(jīng)生長因子受體(TNFR superfamily,member 16)(NGFR)elisa檢測試劑盒

大鼠神經(jīng)生長因子前體(proNGF)elisa檢測試劑盒

大鼠神經(jīng)生長因子(NGF)elisa檢測試劑盒

大鼠神經(jīng)顆粒素(NG/NRGN)elisa檢測試劑盒免費代測

大鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)elisa檢測試劑盒
AsPC-1 (轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細胞)Hoechst33342染色液100T

HPLC試劑盒

HRP酶穩(wěn)定劑100g

HRP酶穩(wěn)定劑20g

HRP酶穩(wěn)定劑50g
實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，最后將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。