細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力,，并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,，包括活細胞的形態(tài)、結構,、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度,、氧氣,、二氧化碳、張力等物理化學的條件,，可以根據實際需要進行人為的控制,，同時，可以施加化學,、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數后,，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時,，可采用克隆化等方法使細胞達到純化,。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡、流式細胞術,、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設備,。

名稱    DLD-1 (結直腸腺癌上皮細胞) (STR鑒定正確)
別稱 DLD 1; DLD1; CoCL3

種屬 人類

年齡（性別） 成人

組織來源 結直腸腺癌上皮細胞

生長特性 貼壁細胞

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

背景描述 DLD-1細胞是由D·L·Dexter和其同事于1977-1979年分離的兩株結直腸腺癌細胞株中的一株。在ATCC和其它地方進行的DNA指紋鑒定和染色體組型分析表明DLD-1細胞與HCT-15細胞相似,，說明這兩者是來自同一個人的不同克隆,。DLD-1細胞和HCT-15細胞的遺傳起源可通過DNA指紋鑒定證實,，但染色體組型分析顯示它們缺乏染色體標記一致改變或數目上一致改變。DLD-1細胞的CSAp陰性(CSAp-),，p53抗原表達呈陽性(p53抗原產生了一個C→T點突變導致241位的Ser→Phe),。DLD-1細胞角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性，癌基因c-myc,、K-ras,、H-ras、N-ras,、myb,、sis和fos的表達呈陽性，癌基因N-myc的表達未做檢測,。DLD-1細胞表達腫瘤特異性核基質蛋白CC-2,、CC-3、CC-4,、CC-5和CC-6,。1979年提交到ATCC的DLD-1細胞代數不明且污染了支原體，其后經過12周多種抗生素聯合培養(yǎng)處理,，處理之后每周用Hoechst染色和標準培養(yǎng)法檢測,。其后連續(xù)11個月不加抗生素培養(yǎng)，DLD-1細胞所有的檢測呈陰性,。

生物安全等級 1

生長培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

倍增時間 ~24-48小時

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

溫度：37℃

致瘤性 Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells).

抗原表達情況 Blood Type O. The cells are weakly positive for keratins and vimentin. The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining. DLD-1 cells are positive for p53 antigen expression (the p53 antigen produced has a C -> T mutation re

基因表達情況 carcinoembryonic antigen (CEA) 0.5 ng/10^6 cells/10 days; colon antigen 3.

保藏機構 ATCC; CCL-221 BCRC; 60132 DSMZ; ACC-278 ECACC; 90102540

使用方法：
收到細胞后,，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,，75%酒精消毒,，拆下封口膜，放入37℃,，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng),。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,，37℃溫浴3min左右,；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液,，再加入*培養(yǎng)液終止消化,；
3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
4) 待細胞*貼壁后,，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基,。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO,，貨號21875-091)，90%,；優(yōu)質胎牛血清,，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現用現配，液氮儲存,。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM,，常溫條件下離心5分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

4mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)1個  綠如藍核酸染料 (UV)0.5mL

4mL DNA 離心超濾管 (30-50 KD)1個  綠如藍蛋白染液250 次

4mL DNA 離心超濾管 (90-150 KD)1個  綠如蘭核酸染料 ( 可見光型 )10mL

4mL DNA 離心超濾管 (150-250 KD)1個  卵巢上皮細胞生長因子5mL

4mL DNA 離心超濾管 (300-500 KD)1個  卵白蛋白標準品,，2mg/mL1mL
大鼠免疫球蛋白M(IgM)elisa檢測試劑盒

大鼠免疫球蛋白G(IgG)elisa檢測試劑盒

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大鼠免疫球蛋白A(IgA)elisa檢測試劑盒免費代測

大鼠絡氨酸酶(TYR)elisa檢測試劑盒
DLD-1 (結直腸腺癌上皮細胞)α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（α-L-Af）測試盒

α-L-巖藻糖苷酶AFU試劑盒 R：50ml×2 速率法

α-半乳糖苷酶（α-GAL）測試盒

α-AMS測試盒 100管/96樣 淀粉-碘比色法

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