細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu),、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度,、氧氣,、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,，同時，可以施加化學(xué),、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細(xì)胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,，需要時,，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達到純化,。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學(xué)、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備,。

名稱    Hep 3B2.1-7 (肝癌細(xì)胞) (STR鑒定正確)
別稱 Hep 3B2_1-7; Hep 3B2; HEP-3B2; HEP3B2; Hep-3B; HEP-3B; Hep 3B; Hep3B; HEP3B

種屬 人類

年齡（性別） 男性,，8歲

組織來源 肝細(xì)胞癌，肝

生長特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

背景描述 Hep 3B2.1-7細(xì)胞是來自8歲男性黑人的組織,。Hep 3B2.1-7細(xì)胞的染色體模式數(shù)目為60,，在裸鼠中能致瘤。Hep 3B2.1-7細(xì)胞整合了完整的乙型肝炎病毒基因組,，需在2級生物安全防護下操作,。

生物安全等級 2

生長培養(yǎng)基 MEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:2-1:3

推薦換液頻率 2~3次/周

倍增時間 ~40-50小時

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

溫度：37℃

致瘤性 Yes, in nude mice.

基因表達情況 alpha fetoprotein (alpha-fetoprotein); hepatitis B surface antigen (HBsAg); albumin; alpha2 macroglobulin (alpha-2-macroglobulin); alpha1 antitrypsin (alpha-1-antitrypsin); transferrin;, alpha1 antichymotrypsin (alpha-1-antichymotrypsin); haptoglobin; ceruloplasmin; plasminogen; complement (C3, C4); C3 activator; fibrinogen; alpha1 acid glycoprotein (alpha-1 acid glycoprotein);, alpha2 HS glycoprotein (alpha-2-HS-glycoprotein); beta lipoprotein (beta-lipoprotein); retinol binding protein (retinol-

保藏機構(gòu) ATCC; HB-8064 BCRC; 60434 BCRJ; 0357 DSMZ; ACC-93 ECACC; 86062703

使用方法：
收到細(xì)胞后，請按照以下方法進行操作,。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,，75%酒精消毒，拆下封口膜,，放入37℃,，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 待細(xì)胞達到80%匯合時準(zhǔn)備進行傳代培養(yǎng),。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次,；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M行接種傳代,，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃,，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察,。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基,。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091),，90%,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存,。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM,，常溫條件下離心5分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

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