細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力,，并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,，包括活細胞的形態(tài),、結構、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,，同時,，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,，需要時,，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡,、流式細胞術、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學,、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備,。

名稱    SK-BR-3 [SKBR3] (乳腺腺癌細胞) (STR鑒定正確)
別稱 SK-Br-3; Sk-Br-3; SK BR 03; SKBR-3; SKBr-3; SK-BR3; SKBr3; SkBr3; SKBR3

種屬 人類

年齡（性別） 女性,，43歲

組織來源 乳腺；乳房,；肋膜滲出液轉移灶

生長特性 貼壁細胞

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

背景描述 SK-BR-3 [SKBR3]細胞是由Trempe·G和Old·L·J于1970年從一位43歲的白人女性乳腺癌患者的胸腔積液中分離得到的,。SK-BR-3 [SKBR3]細胞亞顯微結構特征包括微絲和橋粒、肝糖原顆粒,、大溶酶體,、成束的細胞質(zhì)纖絲；SK-BR-3 [SKBR3]細胞過表達HER2/c-erb-2基因產(chǎn)物,。

生物安全等級 1

生長培養(yǎng)基 McCoy’s 5A＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:2-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

倍增時間 ~48-72小時

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

溫度：37℃

致瘤性 Yes, in nude mice; forms poorly differentiated adenocarcinoma.

受體表達情況 Blood Type A; Rh+; HLA A11, Bw22 (+/-), B40, B18

注意事項 1. SK-BR-3細胞從冷凍保存中恢復的速度可能很慢,。SK-BR-3細胞在低溫保存恢復過程中的附著會很輕。這很正常,。這種細胞系在培養(yǎng)的整個第一周以及每次繼代培養(yǎng)后都表現(xiàn)出松散的附著和漂浮的細胞,，這并不少見； 2. 如果存在大量漂浮物,，尤其是在生長的第一周,，在啟動復蘇后幾天內(nèi)保持細胞不受干擾。如果仍然有很多漂浮物,，用臺盼藍檢查生存能力,。通過輕輕離心保留漂浮細胞，并在更換培養(yǎng)基時將其與附著的細胞一起添加回同一培養(yǎng)容器中，這一點很重要,。不要分離或丟棄漂浮細胞,。細胞最初以小斑塊或細胞群的形式附著，許多細胞團仍處于懸浮狀態(tài),。幾天后,，生長將從貼壁細胞群向外延伸。通常也會出現(xiàn)一些細胞碎片,。漂浮細胞應始終通過溫和離心（125 x g,，持續(xù)5至7分鐘）保留，并在換液或傳代后放回培養(yǎng)容器,； 3. SK-BR-3細胞傾向于相互堆積,。在細胞達到70-80%匯合度之前不要用消化處理細胞。如果讓細胞過度生長,，細胞就會分離漂浮,。

保藏機構 ATCC; HTB-30 DSMZ; ACC-736

使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作,。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,，75%酒精消毒，拆下封口膜,，放入37℃,，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng),。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次,；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后吸棄消化液,，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代,，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃,，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察,。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基,。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO,，貨號21875-091)，90%,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存,。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞,，1000RPM,，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

CD73抗體

神經(jīng)細胞粘附分子CALL抗體

6型膠原蛋白α5抗體

接觸蛋白相關蛋白4抗體

CD24抗體
大鼠δ氨基乙酰丙酸脫水酶(ALAD)elisa檢測試劑盒

大鼠γ-半合成酶(γ-GCS)elisa檢測試劑盒

大鼠γ干擾素受體(IFN-γR)elisa檢測試劑盒

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大鼠γ分泌酶elisa檢測試劑盒
SK-BR-3 [SKBR3] (乳腺腺癌細胞)大鼠c-jun elisa檢測試劑盒

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