培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí),。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

產(chǎn)品屬性：

名稱    HuT 78 (T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞) (STR鑒定正確)
別稱 HUT 78; HuT-78; HUT-78; HuT78; Hut78; HUT78; NCI-H78

種屬 人類

年齡（性別） 男性，53歲

組織來(lái)源 疾?。浩つw白血病(塞扎里綜合癥),；細(xì)胞類型：皮膚T淋巴細(xì)胞

生長(zhǎng)特性 懸浮細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 淋巴母細(xì)胞樣

背景描述 HuT 78細(xì)胞是由A.F.Gazdar于1981年從一名53歲患有塞扎萊綜合癥的白人男性外周血中分離并建立。HuT 78細(xì)胞具有成熟T細(xì)胞的誘導(dǎo)－輔助特性,。HuT 78細(xì)胞的表面能提出具有生物活性的IL-2,。

生物安全等級(jí) 1

生長(zhǎng)培養(yǎng)基 IMDM＋20% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 3×10^5-5×10^5cells/mL

推薦換液頻率 2~3次/周

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

溫度：37℃

致瘤性 Yes, in nude mice when injected intracranially.

受體表達(dá)情況 interleukin 2 (IL-2), expressed

抗原表達(dá)情況 CD4; Homo sapiens

基因表達(dá)情況 interleukin 2, tumor necrosis factor alpha (TNF alpha), CD4; Homo sapiens

注意事項(xiàng) 該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請(qǐng)注意離心收集細(xì)胞懸液,；請(qǐng)勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液,。

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; TIB-161 ATCC; CRM-TIB-161 ECACC; 88041901

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1,、無(wú)菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，最后將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
LPS(TLR4 激活劑 )0.5mg  ATP 溶液,，100mM0.25mL

LY294002(PI3K 抑制劑 )1mg  APMSF 溶液,，10mg/mL1mL

Metformin(LKB1-AMPK 激活劑 )1g  AP 標(biāo)記的抗抗體10μL

MG-132(Proteasome 抑制劑 )1mg  AMV cDNA 第一鏈合成試劑盒30 次

Monensin ( 蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑 )100mg  Aminoally-dUTP 溶液，10mM100μL
FITC標(biāo)記的tRNA的蛋白轉(zhuǎn)移酶1抗體

FITC標(biāo)記的鹽轉(zhuǎn)運(yùn)三磷酸腺苷酶抗體

FITC標(biāo)記的鹽耐藥蛋白ARS2抗體

FITC標(biāo)記的腫瘤/抗原81抗體

FITC標(biāo)記的載脂蛋白L3抗體
HuT 78 (T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞)大鼠補(bǔ)體片斷5(C5)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠補(bǔ)體片斷5a(C5a)elisa分析檢測(cè)試劑盒

大鼠補(bǔ)體片斷5a(C5a)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠補(bǔ)體受體2(CR2)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠補(bǔ)體因子B(CFB)elisa檢測(cè)試劑盒

冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí),， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。