名稱    A9 (小鼠皮下結締組織細胞) (種屬鑒定正確)
別稱 A9; A9 (Hamprecht); A9(Hamprecht); AG 9; GM00346; GM-346; GM346

種屬 小鼠

年齡（性別） 雄性,，100天

組織來源 皮下結締組織；疏松結締組織和脂肪,；正常

生長特性 貼壁細胞

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

背景描述 A9細胞是從野生型細胞株L中分離得到的,。A9細胞對HAT選擇培養(yǎng)基敏感，并缺失了腺苷轉磷酸核糖基酶與次轉磷酸核糖基酶,；A9細胞對8-氮鳥嘌呤(0.003mg/ml)和6-硫代鳥嘌呤(0.1mM)有抗性,。

生物安全等級 1

生長培養(yǎng)基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

溫度：37℃

致瘤性 Yes, in nude mice.

保藏機構 ATCC; CCL-1.4 ATCC; CRL-6319 BCRC; 60138
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細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,，根據(jù)要求可始終保持細胞活力,，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,，包括活細胞的形態(tài),、結構,、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度,、氧氣,、二氧化碳、張力等物理化學的條件,，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,，同時,，可以施加化學、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,，需要時,，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡,、流式細胞術、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學,、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設備。

使用方法：
收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃,，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng),。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,，37℃溫浴3min左右,；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化,；
3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代,，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃,，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO,，貨號21875-091)，90%,；優(yōu)質胎牛血清，10%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存,。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM,，常溫條件下離心5分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

超快核酸轉膜試劑盒5次  酵母 tRNA 溶液 A( 粗提 )1.5mL

核酸印跡膜染液100mL  酵母 DNAout50 次

超級雜交液 A（不含甲酰胺）100mL  角質細胞生長因子5mL

超級雜交液 B（含甲酰胺）100mL  角質細胞生長因子 - 不含動物成分5mL

超級雜交液 (Oligo 探針 )10mL  角質細胞生長因子 - 不含 BPE5mL
D-二聚體D-Dimer試劑盒 R1：18ml×1 R2：6ml×1 膠乳增強

β-羥丁酸D3-H試劑盒 R1：45ml×2 R2：15ml×2 酶比色法

同型半Hcy試劑盒 R1：37ml×2 R2：10ml×2 酶循環(huán)法

補體C3試劑盒 R1：45ml×1 R2：15ml×1 免疫濁度法

補體C4試劑盒 R1：45ml×1 R2：15ml×1 免疫濁度法
A9 (小鼠皮下結締組織細胞)大鼠粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GMCSF/CSF2)elisa檢測試劑盒

大鼠粒細胞克隆刺激因子(G-CSF)elisa檢測試劑盒

大鼠粒細胞-克隆刺激因子（G-CSF）elisa檢測試劑盒

大鼠粒細胞趨化蛋白2(GCP2)elisa檢測試劑盒

大鼠連環(huán)蛋白β1(CTNNβ1)elisa檢測試劑盒