冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品屬性：

名稱    BS-C-1 (非洲綠猴腎細胞)
別稱 BSC-1; BSC1; GMK, BSC-1; Biologics Standards-Cercopithecus-1

種屬 綠猴

年齡（性別） 不詳

組織來源 腎

生長特性 貼壁細胞

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

背景描述 BS-C-1細胞建系于1961年,；BS-C-1細胞對1型脊髓灰質炎病毒(Poliovirus type 1),、SV40病毒(SV40 virus)、水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus)敏感,，是病毒診斷研究的有用材料,。

生物安全等級 1

生長培養(yǎng)基 MEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

倍增時間 ~72小時

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

溫度：37℃

基因表達情況 keratin

保藏機構 ATCC; CCL-26 BCRC; 60078 ECACC; 85011422

培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%,，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,，注意凍 存管做好標識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。
動物細胞核蛋白微量制備試劑盒100 次  S-Methyl-ITU.sulfate(iN0S 抑制劑 )50mg

動物線粒體總蛋白提取劑盒50 次  Simvastatin(HMG-CoA Reductase 抑制劑 )10mg

一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒30 次  Sephadex G50 介質10mL

一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒100 次  SDS-PAGE 制備試劑盒50 次

細胞核蛋白提取試劑盒50 次  SDS-PAGE 預制膠12 塊
大鼠γ干擾素(IFNγ)elisa檢測試劑盒

大鼠γ分泌酶(GACE)elisa檢測試劑盒

大鼠γ-氨基丁酸受體亞基α1(GABRA1)elisa檢測試劑盒

大鼠γ氨基丁酸(GABA)elisa檢測試劑盒

大鼠β-轉導重復相容蛋白(β-TrCP)elisa檢測試劑盒
BS-C-1 (非洲綠猴腎細胞)大鼠支鏈α-酮酸脫氫酶(BCKDK)elisa檢測試劑盒

大鼠脂蛋白α(Lp-α)elisa檢測試劑盒

大鼠脂蛋白關聯(lián)磷脂酶A2(LpPLA2)elisa檢測試劑盒

大鼠脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)elisa檢測試劑盒

大鼠脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)elisa檢測試劑盒
實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，最后將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5、PBS沖洗細胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。