名稱 PK-15 (豬腎細(xì)胞)
別稱 PK(15); PK (15); PK 15; PK15; Porcine Kidney-15
種屬 野豬
年齡(性別) 成年
組織來源 腎臟
生長特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
背景描述 PK-15細(xì)胞是由Stice·E建系于1955年,;PK-15細(xì)胞是PK-1a細(xì)胞的克隆系,PK-15細(xì)胞可用于多種病毒的增值及特性研究,。另外,電鏡觀察發(fā)現(xiàn),,PK-15細(xì)胞內(nèi)有C-型病毒顆粒存在,,是研究C-型病毒的材料。
生物安全等級 1
生長培養(yǎng)基 MEM(ATCC改良)+10% FBS+1% P/S
推薦傳代比例 1:2-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
倍增時間 ~12-25小時
凍存條件
凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
溫度:37℃
保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CCL-33 ATCC; CRL-6593 DSMZ; ACC-640
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![88.jpg 88.jpg](https://img72.chem17.com/6fd5d5abffebbb9e53fdab16daa3bfc6bde969098f672f480acb890c71042568e5af405a17cadc80.jpg)
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,,包括活細(xì)胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu)、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制,,同時,,可以施加化學(xué)、物理,、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,,需要時,,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學(xué),、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備,。
![圖片2.jpg 圖片2.jpg](https://img76.chem17.com/6fd5d5abffebbb9e53fdab16daa3bfc687183e52462e599a1bfcf6f51ff2786e5e60e9e0600a9e75.jpg)
使用方法:
收到細(xì)胞后,,請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,,75%酒精消毒,,拆下封口膜,放入37℃,,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,,37℃溫浴3min左右,;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,,再加入*培養(yǎng)液終止消化,;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,,然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
4) 待細(xì)胞*貼壁后,,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基,。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
多型孢毛霉 宋氏志賀氏菌
蘇云金芽胞桿菌山東亞種Bacillusthuringiensissubsp.shandongiensis 福氏志賀氏菌
結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂90mm 10 個/包 干酪棒桿菌(乳酪棒桿菌)
蜜環(huán)菌 生孢梭菌(產(chǎn)芽孢梭狀芽孢桿菌)
馬紅球菌 擬熱帶假絲酵母
大鼠白介素1α(IL-1α)elisa檢測試劑盒
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大鼠白介素17(IL-17)elisa檢測試劑盒
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PK-15 (豬腎細(xì)胞)大鼠轉(zhuǎn)化生長因子α(TGFα)elisa檢測試劑盒
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