細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控,、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等,。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度,、氧氣,、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,,同時(shí),可以施加化學(xué),、物理,、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下,。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,,需要時(shí),,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察,、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
![88.jpg 88.jpg](https://img72.chem17.com/6fd5d5abffebbb9e53fdab16daa3bfc6bde969098f672f480acb890c71042568e5af405a17cadc80.jpg)
名稱 4179 (長(zhǎng)尾綠猴胚胎細(xì)胞)
組織來(lái)源 胚胎,,心臟,,舌
生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 MEM+10% FBS+1% P/S
推薦換液頻率 2~3次/周
凍存條件
凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,95%;CO2,,5%
溫度:37℃
![圖片2.jpg 圖片2.jpg](https://img76.chem17.com/6fd5d5abffebbb9e53fdab16daa3bfc687183e52462e599a1bfcf6f51ff2786e5e60e9e0600a9e75.jpg)
使用方法:
收到細(xì)胞后,,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,,75%酒精消毒,,拆下封口膜,放入37℃,,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜,,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,,37℃溫浴3min左右,;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,,再加入*培養(yǎng)液終止消化,;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,,然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
4) 待細(xì)胞*貼壁后,,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基,。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,,貨號(hào)21875-091),90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
多黏類芽孢桿菌 刺孢吸水鏈霉菌昆明變種 Streptomyces hygrospinocus
無(wú)殼曲霉 蘇云金芽胞桿菌蠟螟亞種 Bacillus thuringiensis subsp. galleriae
土曲霉 長(zhǎng)根菇(長(zhǎng)根奧德磨)
奇異變形桿菌凍干粉 黑菇,、煙色紅菇
單增李斯特菌 阿達(dá)青霉
大鼠白介素10(IL10)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠白蛋白啟動(dòng)子D位點(diǎn)結(jié)合蛋白(DBP)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠白蛋白(ALB)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4(OCT4)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠氨乙酰丙酸δ脫水酶(ALAD)elisa檢測(cè)試劑盒
4179 (長(zhǎng)尾綠猴胚胎細(xì)胞)大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠腫瘤壞死因子β(TNFβ)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠腫瘤壞死因子γ(TNF-γ)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)elisa檢測(cè)試劑盒
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