EBTr [NBL-4] (牛胚氣管細胞)公司其它各種產(chǎn)品DHX15蛋白抗體 乳腺癌抗雌激素耐藥蛋白1
DIAPH2蛋白抗體 乳腺癌抗雌激素抵抗蛋白2抗體
0酸化蓬亂蛋白2抗體 乳腺癌基因刪除蛋白2抗體
Wnt通路抑制因子2抗體 乳腺癌和卵巢癌易感基因RAD51C抗體
誘捕受體2抗體 乳腺癌雌激素調(diào)控蛋白GREB1抗體

產(chǎn)品屬性：

名稱    EBTr [NBL-4] (牛胚氣管細胞)
別稱 EBTr (NBL-4); NBL-4; Embryonic Bovine Tracheal cells

年齡（性別） 雄,；胚胎

組織來源 胚胎,，氣管

生長特性 貼壁細胞

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

背景描述 EBTr(NBL-4)細胞牛痢疾病毒(BVDV)陰性,。

生物安全等級 1

生長培養(yǎng)基 MEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:2-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

溫度：37℃

保藏機構(gòu) ATCC; CCL-44 ATCC; CRL-6565 ECACC; 87090202

冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細胞,，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%,，細胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，最后將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
發(fā)根土壤桿菌（發(fā)根植物單胞菌）   乙型副傷寒沙門菌CMCC50094凍干粉南京便診

威爾酵母   大豆慢生根瘤菌

葉柄粘球菌   頭狀絲孢酵母

熱帶念珠菌ATCC750凍干粉   發(fā)根土壤桿菌(發(fā)根植物單胞菌)

泡盛曲霉   腸膜明串珠菌
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大鼠組織金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP4)elisa檢測試劑盒

大鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA) elisa檢測試劑盒

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