細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度,、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件,,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,,可以施加化學(xué),、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,,需要時,,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
![88.jpg 88.jpg](https://img72.chem17.com/6fd5d5abffebbb9e53fdab16daa3bfc6bde969098f672f480acb890c71042568e5af405a17cadc80.jpg)
名稱 OK (負(fù)鼠腎細(xì)胞)
別稱 Opossum Kidney; OK-WT
種屬 負(fù)鼠
年齡(性別) 雌性,,成年
組織來源 正常,;腎,皮質(zhì),;近小管
生長特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
背景描述 OK細(xì)胞最初是為研究X染色體失活時提供X染色體,;隨后發(fā)現(xiàn),OK細(xì)胞是的腎近曲小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)模型。OK細(xì)胞在培養(yǎng)時表達多種受體,,并被廣泛地用作研究這些受體的模型,。
生物安全等級 1
生長培養(yǎng)基 MEM+10% FBS+1% P/S
推薦傳代比例 1:3-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
倍增時間 ~18小時
凍存條件
凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
溫度:37℃
受體表達情況 alpha 2 adrenergic, expressed; atrial natriuretic peptide (ANP), expressed; serotonin, expressed parathyroid hormone (PTH), expressed alpha 2 adrenergic; serotonin; parathyroid hormone (PTH); atrial natriuretic peptide (ANP)
保藏機構(gòu) ATCC; CRL-1840 ECACC; 91021202
![圖片2.jpg 圖片2.jpg](https://img76.chem17.com/6fd5d5abffebbb9e53fdab16daa3bfc687183e52462e599a1bfcf6f51ff2786e5e60e9e0600a9e75.jpg)
使用方法:
收到細(xì)胞后,請按照以下方法進行操作,。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,,75%酒精消毒,拆下封口膜,,放入37℃,,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 待細(xì)胞達到80%匯合時準(zhǔn)備進行傳代培養(yǎng),。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次,;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M行接種傳代,,然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
4) 待細(xì)胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察,。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基,。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
二磷酸腺苷核糖基轉(zhuǎn)移酶5抗體
三磷酸腺苷酶家族蛋白3A抗體
載脂蛋白J抗體
載脂蛋白H抗體
二磷酸腺苷核糖基轉(zhuǎn)移酶4抗體
大鼠白介素26(IL-26)elisa分析檢測試劑盒
大鼠白介素23(IL-23)elisa分析檢測試劑盒
大鼠白介素22(IL-22)elisa分析檢測試劑盒
大鼠白介素21(IL-21)elisa分析檢測試劑盒
大鼠白介素20(IL-20)elisa分析檢測試劑盒
OK (負(fù)鼠腎細(xì)胞)大鼠組蛋白乙?;D(zhuǎn)移酶1(HAT1)elisa檢測試劑盒
大鼠組織蛋白酶D(CTSD)elisa檢測試劑盒
大鼠組織蛋白酶G(CTSG)elisa檢測試劑盒
大鼠組織蛋白酶K(cath-K)elisa檢測試劑盒
大鼠組織蛋白酶K(CTSK)elisa檢測試劑盒
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