名稱    MDBK [NBL-1] (牛腎細胞)
別稱 MDBK (NBL-1); NBL-1; Madin-Darby Bovine Kidney; Madin Darby Bovine Kidney

種屬 牛

年齡（性別） 雄性,，成年

組織來源 腎；正常細胞

生長特性 貼壁細胞

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

背景描述 MDBK(NBL-1)細胞是由S·H·Madin和N·B·Darby在1957年2月18日從一只表觀正常的成年牛腎臟建立的,。1973年,，這株MDBK(NBL-1)細胞被牛病毒性痢疾病毒(BVDV)感染；1982年,，發(fā)現(xiàn)了一株未被BVDV感染的MDBK(NBL-1)細胞株,，此細胞最初來自ATCC1967年7月第96代的凍存管,。MDBK(NBL-1)細胞的后代經NVSL檢測，未發(fā)現(xiàn)被任何病毒污染的證據,。1982年8月,，R·A·Van Deusen將MDBK(NBL-1)提供給ATCC時,，已傳代至第110代,；MDBK(NBL-1)細胞未被BVDV感染。

生物安全等級 2

生長培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:2-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

倍增時間 ~35小時

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

溫度：37℃

基因表達情況 keratin

保藏機構 ATCC; CCL-22 ATCC; CRL-6071DSMZ; ACC-174 ECACC; 90050801
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細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,，根據要求可始終保持細胞活力,，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,，包括活細胞的形態(tài),、結構、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制,，同時,，可以施加化學、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,，需要時,，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細胞術,、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學,、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設備。

使用方法：
收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒,，拆下封口膜,，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右,；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化,；
3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,，放入37℃,，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO,，貨號21875-091),，90%,；優(yōu)質胎牛血清，10%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞,，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

蛾微桿菌   刺孢小單孢菌絳紅變種

糞產堿桿菌   阿舒多囊霉

干燥棒桿菌   豬霍亂沙門氏菌豬霍亂亞種

白色念珠菌ATCC10231凍干粉   頂青霉

少根根霉   大腸桿菌Escherichiacoli
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