培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,，注意凍 存管做好標識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

產(chǎn)品屬性：

名稱    L6 (大鼠成肌細胞) (種屬鑒定正確)
別稱 L-6; L-6 myoblast

種屬 大鼠

年齡（性別） 不詳

組織來源 骨胳??；成肌細胞

生長特性 貼壁細胞

細胞形態(tài) 成肌細胞樣

背景描述 L6成肌細胞是由Yaffe從甲基膽蒽存在下大鼠大腿肌的原代培養(yǎng)物最初兩代中分離得到。L6細胞在培養(yǎng)基中可融合形成多核的肌管和橫紋肌纖維,。L6細胞融合的程度隨著代數(shù)的增加而下降；因而,，L6細胞應冷凍于低代次階段并周期性地重新克隆以選擇融合能力強的細胞,。如果讓培養(yǎng)容器中的細胞長滿，L6細胞的成肌組分將迅速耗盡,。

生物安全等級 1

生長培養(yǎng)基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

溫度：37℃

基因表達情況 myosin

保藏機構 ATCC; CRL-1458 BCRJ; 0141

實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5、PBS沖洗細胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
非凍型組織 RNA 保存液100mL  組織培養(yǎng)基蛋白酶抑制劑1mL

非凍型組織 RNA 保存液250mL  標簽蛋白染色試劑盒10 次

非凍型血液 RNA 保存液100mL  紫外交聯(lián)儀1臺

冷凍型血液 RNA 保存液100mL  滋養(yǎng)層細胞生長因子5mL

非凍型細菌 RNA 保存液100mL  壯觀霉素溶液 ,50mg/mL10mL
大鼠表皮生長因子受體(EGFR)elisa檢測試劑盒

大鼠表皮生長因子(EGF)elisa檢測試劑盒

大鼠吡啶交聯(lián)物(PY)elisa檢測試劑盒

大鼠吡啶酚(PYD)elisa檢測試劑盒

大鼠胞外銅鋅超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD/SOD3)elisa檢測試劑盒
L6 (大鼠成肌細胞)Q10含量試劑盒

Q-還原酶 20管/10樣

腐胺（Put）含量試劑盒

復合消化液 10ml

改良油紅O染色試劑盒100ml

冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。