培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,,加入約 8ml 培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,;
1. 細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
![圖片2.jpg 圖片2.jpg](https://img76.chem17.com/6fd5d5abffebbb9e53fdab16daa3bfc687183e52462e599a1bfcf6f51ff2786e5e60e9e0600a9e75.jpg)
產(chǎn)品屬性:
名稱 MMQ (大鼠垂體瘤細(xì)胞) (種屬鑒定正確)
種屬 大鼠
年齡(性別) 5日齡
組織來源 腦垂體
生長特性 懸浮細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 圓形細(xì)胞,,聚團(tuán)生長
背景描述 The cells secrete prolactin and express functional dopamine receptors
生物安全等級 1
生長培養(yǎng)基 Ham's F-12K+15% HS+2.5% FBS+1% P/S
推薦傳代比例 3×10^5-5×10^5cells/mL
推薦換液頻率 2~3次/周
倍增時間 ~48小時
凍存條件
凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
溫度:37℃
致瘤性 No, in immunosuppressed mice. Yes, in semisolid medium
受體表達(dá)情況 dopamine
注意事項(xiàng) 該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,,請注意離心收集細(xì)胞懸液;請勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液,。
保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-10609 DSMZ; ACC-484 KCB; KCB 200845YJ
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,最后將成1mm3左右大小,;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h;
6,、用PBS沖洗3次,,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
粉紅木霉 瑞士乳桿菌
葡酒色被孢霉 金黃色葡萄球菌金黃亞種
蘇云金芽胞桿菌托馬諾夫亞種Bacillusthuringiensissubsp.toumanoffii 馬其頓假絲酵母
糞腸球菌ATCC29212凍干粉 銅綠假單胞菌凍干粉
孔雀石綠鏈霉菌 構(gòu)巢裸胞殼
大鼠雌二醇受體(ER)elisa檢測試劑盒
大鼠雌二醇(E2)elisa檢測試劑盒
大鼠垂草扁桃酸(VMA)elisa檢測試劑盒
大鼠穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)elisa檢測試劑盒
大鼠遲現(xiàn)抗原(VLA)elisa檢測試劑盒
MMQ (大鼠垂體瘤細(xì)胞)核黃素轉(zhuǎn)運(yùn)因子1(RFT1)elisa分析檢測試劑盒
核黃素轉(zhuǎn)運(yùn)因子1(RFT1)elisa檢測試劑盒
核黃素轉(zhuǎn)運(yùn)因子2(RFT2)elisa分析檢測試劑盒
核黃素轉(zhuǎn)運(yùn)因子2(RFT2)elisa檢測試劑盒
核黃素轉(zhuǎn)運(yùn)因子3(RFT3)elisa分析檢測試劑盒
冷凍保存細(xì)胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些,。