細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,,并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度,、氧氣,、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,,可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制,,同時,可以施加化學(xué),、物理,、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下,。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,,需要時,,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
![圖片13.jpg 圖片13.jpg](https://img76.chem17.com/6fd5d5abffebbb9e53fdab16daa3bfc63ba2d802b4762addf4b266153578651755a1cef92d547c74.jpg)
名稱 GH3 (大鼠垂體瘤細(xì)胞)(種屬鑒定正確)
別稱 GH 3
種屬 大鼠
年齡(性別) 7月齡
組織來源 垂體
生長特性 半貼半懸
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
背景描述 GH3細(xì)胞是由Tashjian·A·H等人于1965年7月從一只7月齡的雌性Wistar-Furth大鼠的垂體腫瘤中分離建立的,。GH3細(xì)胞不是直接來源于GH1細(xì)胞的克隆,,而是從原代培養(yǎng)的GH1細(xì)胞在大鼠身上傳代兩次形成的腫瘤中建立的。上皮細(xì)胞樣的GH3細(xì)胞比GH1細(xì)胞分泌更高水平的生長激素,,也可產(chǎn)生催乳素,。對調(diào)控GH3細(xì)胞分泌蛋白類激素的研究表明,,氫化可以刺激GH3細(xì)胞生長激素的分泌、抑制催乳素的產(chǎn)生,。
生物安全等級 1
生長培養(yǎng)基 Ham's F-12K+15% HS+2.5% FBS+1% P/S
推薦傳代比例 1:2-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
倍增時間 ~60-90小時
凍存條件
凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
溫度:37℃
基因表達(dá)情況 prolactin; growth hormone (somatotrophin)
保藏機構(gòu) ATCC; CCL-82.1 DSMZ; ACC-469 ECACC; 87012603
![88.jpg 88.jpg](https://img72.chem17.com/6fd5d5abffebbb9e53fdab16daa3bfc6bde969098f672f480acb890c71042568e5af405a17cadc80.jpg)
使用方法:
收到細(xì)胞后,,請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,,75%酒精消毒,,拆下封口膜,放入37℃,,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,,37℃溫浴3min左右,;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,,再加入*培養(yǎng)液終止消化,;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,,然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
4) 待細(xì)胞*貼壁后,,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基,。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,,貨號21875-091),90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
肺炎克雷伯菌CMCC46117凍干粉 毛殼
葡萄芽假絲酵母 干酪棒桿菌(乳酪棒桿菌)
短小芽孢桿菌 枯草芽孢桿菌CMCC63501凍干粉南京便診
松生擬層孔菌 生孢梭菌(產(chǎn)芽孢梭狀芽孢桿菌)
兩型孢毛霉 納地青霉
大鼠腸堿性磷酸酶(ALPI)elisa檢測試劑盒
大鼠叉頭框蛋白O1(FOXO1)elisa檢測試劑盒
大鼠叉頭框蛋白M1(FOXM1)elisa檢測試劑盒
大鼠層粘連蛋白β1(LAMβ1)elisa檢測試劑盒
大鼠層粘連蛋白α1(LAMα1)elisa檢測試劑盒
GH3 (大鼠垂體瘤細(xì)胞)(種屬鑒定正確)鮭魚補體蛋白3(C3)elisa分析檢測試劑盒
鮭魚補體蛋白3(C3)elisa檢測試劑盒
鮭魚補體蛋白4(C4)elisa分析檢測試劑盒
鮭魚補體蛋白4(C4)elisa檢測試劑盒
鮭魚促胰液素/胰泌素(SCT)elisa分析檢測試劑盒
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