冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。

產(chǎn)品屬性：

名稱(chēng)    小鼠外周血中性粒細(xì)胞
2.組織來(lái)源：外周血

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠外周血中性粒細(xì)胞分離自外周血,；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中,，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞,，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱(chēng)為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類(lèi)開(kāi)始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念,。白細(xì)胞是一類(lèi)無(wú)色,、球形,、有核的血細(xì)胞。白細(xì)胞不是一個(gè)均一的細(xì)胞群,，根據(jù)其形態(tài),、功能和來(lái)源部位可以分為三大類(lèi)：粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞,，其中粒細(xì)胞又可根據(jù)胞質(zhì)中顆粒的染色性質(zhì)不同,，分為中性粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞三種,。中性粒細(xì)胞是在瑞氏（Wright）染色血涂片中,，胞質(zhì)呈無(wú)色或極淺的淡紅色，有許多彌散分布的細(xì)小的（0.2～0.4微米）淺紅或淺紫色的*顆粒,。細(xì)胞核呈桿狀或2～5分葉狀,，葉與葉間有細(xì)絲相連。中性粒細(xì)胞具趨化作用,、吞噬作用和殺菌作用,。中性粒細(xì)胞來(lái)源于骨髓，具有分葉形或桿狀的核,，胞漿內(nèi)含有大量既不嗜堿也不嗜酸的中性細(xì)顆粒,。這些顆粒多是溶酶體，內(nèi)含髓過(guò)氧化酶,、,、堿性磷酸酶和酸性水解酶等豐富的酶類(lèi)，與細(xì)胞的吞噬和消化功能有關(guān),。中性粒細(xì)胞在血液的非特異性免疫中起著十分重要的作用,，它處于機(jī)體抵御微生物病原體，特別是在化膿性細(xì)菌入侵的線,，具有很強(qiáng)的吞噬活性,，可吞噬細(xì)菌,、衰老的紅細(xì)胞,、抗原一抗體復(fù)合物和壞死的細(xì)胞等。中性粒細(xì)胞內(nèi)含有大量溶酶體酶,，因此能將吞噬入細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌和組織碎片*分解,。當(dāng)中性粒細(xì)胞吞噬數(shù)十個(gè)細(xì)菌后，自身發(fā)生解體,，所釋出的各種溶酶體酶類(lèi)能溶解周?chē)M織而形成膿液,。中性粒細(xì)胞是人體內(nèi)壽命短的細(xì)胞，一般體外培養(yǎng)12-24h內(nèi)活性穩(wěn)定,，48h活性下降,，96h基本死亡,。

5.方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠外周血中性粒細(xì)胞采用取外周血、通過(guò)密度梯度離心法制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠外周血中性粒細(xì)胞經(jīng)瑞氏染色法，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 懸浮

細(xì)胞形態(tài) 圓形

傳代特性 不增殖,；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類(lèi)；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí),。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱,，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。
平蓋靈芝（樹(shù)舌）   0.5%葡萄糖肉湯100ml

異常漢遜酵母   涇陽(yáng)鏈霉菌

甲型副傷寒沙門(mén)菌凍干粉   肺炎克雷伯氏菌肺炎亞種

清酒乳桿菌清酒亞種   亞膜漢遜酵母

發(fā)酵纖維單胞菌   漢遜德巴利酵母
大鼠載脂蛋白B-48(ApoB48)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠載脂蛋白B48(Apo B48)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠載脂蛋白B100(apo-B100)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠載脂蛋白B100(Apo B100)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠載脂蛋白A5(apo-A5)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠外周血中性粒細(xì)胞人高密度脂蛋白(HDL)elisa分析檢測(cè)試劑盒

人高密度脂蛋白1(HDL1)elisa分析檢測(cè)試劑盒

人高密度脂蛋白2(HDL2)elisa分析檢測(cè)試劑盒

人高密度脂蛋白3(HDL3)elisa分析檢測(cè)試劑盒

人高密度脂蛋白(HDL-C)elisa分析檢測(cè)試劑盒
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。