培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%,，細胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

產(chǎn)品屬性：

名稱    微血管周細胞
2.組織來源：微血管組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

人微血管周細胞分離自微血管組織；周細胞（pericyte）又稱Rouget細胞和壁細胞,，是一種包圍全身毛細血管和靜脈中內(nèi)皮細胞的細胞,，可以收縮。周細胞嵌入毛細血管內(nèi)皮細胞的基膜中,，通過物理接觸和旁分泌信號與內(nèi)皮細胞進行細胞通訊,，監(jiān)視和穩(wěn)定內(nèi)皮細胞的成熟過程。此外,，周細胞還具有調(diào)控毛細血管血流量,、細胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用，其多功能性是目前研究的熱點之一,，所以對血管周細胞的生物學特征,、標記物、細胞功能等的研究都為相關(guān)研究提供基礎資料,。周細胞產(chǎn)生手指狀的外延以調(diào)控毛細血管的血流量,。周細胞和內(nèi)皮細胞之間共同擁有一個基膜，基膜上有多種細胞連接,，包括多種整合素,、神經(jīng)鈣黏素、纖連蛋白以及接合素,。它還參與毛細血管直徑的雙向調(diào)控,；毛細血管受損時，周細胞還可增殖，分化為內(nèi)皮細胞和成纖維細胞。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的人血管周細胞采用膠原酶-中性聯(lián)合消化法及不銹鋼網(wǎng)篩過濾法結(jié)合密度梯度離心法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的人微血管周細胞經(jīng)alpha-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
人白細胞分離液 1.078200mL  0.5mL DNA 離心超濾管 (90-150 KD)1個

人中性粒細胞分離液 1.085200mL  0.5mL DNA 離心超濾管 (30-50 KD)1個

人粒細胞分離液 1.113200mL  0.5mL DNA 離心超濾管 (150-250 KD)1個

小鼠腫瘤細胞分離液 1.070200mL 

小鼠內(nèi)皮細胞分離液 1.071200mL
非蛋白質(zhì)巰基測試盒

非蛋白質(zhì)巰基測試盒

二氫黃酮醇還原酶（DFR）測試盒

二氫黃酮醇還原酶（DFR）測試盒

花青素還原酶（ANR）測試盒
微血管周細胞人透明質(zhì)酸酶（HAase）elisa檢測試劑盒

人褪黑素（MT）elisa檢測試劑盒

人脫氫表雄酮硫酸酯（DHEA-S）elisa檢測試劑盒

人脫氧吡啶啉（DPD）elisa檢測試劑盒

人唾液粘蛋白（MG）elisa檢測試劑盒

冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。