產品屬性：

名稱    乳腺癌血管周細胞
2.組織來源：乳腺癌組織

3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

人乳腺癌血管周細胞分離自乳腺癌組織,；女性乳腺是由皮膚,、纖維組織、乳腺腺體和脂肪組成的,，乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤,。乳腺癌中99%發(fā)生在女性，男性僅占1%,。乳腺并不是維持機體生命活動的重要器官,，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌細胞喪失了正常細胞的特性,，細胞之間連接松散,，容易脫落。癌細胞一旦脫落,，游離的癌細胞可以隨血液或淋巴液播散全身,，形成轉移，危及生命,。目前,，乳腺癌已成為威脅女性身心健康的常見腫瘤,。周細胞（pericyte）又稱Rouget細胞和壁細胞，是一種包圍全身毛細血管和靜脈中內皮細胞的細胞,，可以收縮,。周細胞嵌入毛細血管內皮細胞的基膜中，通過物理接觸和旁分泌信號與內皮細胞進行細胞通訊,，監(jiān)視和穩(wěn)定內皮細胞的成熟過程,。此外，周細胞還具有調控毛細血管血流量,、細胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用,，其多功能性是目前研究的熱點之一，所以對血管周細胞的生物學特征,、標記物,、細胞功能等的研究都為相關研究提供基礎資料。周細胞產生手指狀的外延以調控毛細血管的血流量,。周細胞和內皮細胞之間共同擁有一個基膜,，基膜上有多種細胞連接，包括多種整合素,、神經鈣黏素,、纖連蛋白以及接合素。它還參與毛細血管直徑的雙向調控,；毛細血管受損時,，周細胞還可增殖，分化為內皮細胞和成纖維細胞,。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的人乳腺癌血管周細胞采用膠原酶-中性聯合消化法及不銹鋼網篩過濾法結合密度梯度離心法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

公司實驗室分離的人乳腺癌血管周細胞經alpha-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右,；3代以內狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數,。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
實驗報告：
產品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次，每次10min,，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
溶液 ,100mg/mL1mL  TCEP 鹽酸膦1g

溶液 ,100mg/mL1mL  TCEP 溶液，0.5M5mL

干粉1g  TBE 電泳液 ,10×250mL

溶液 ,25mg/mL10mL  TBE 電泳液 ,10×2500mL

 A 溶液 ,10mg/mL1mL  TB1 感受態(tài)細胞10×100μL
谷丙轉氨酶（GPT)測試盒

谷丙轉氨酶（GPT)測試盒

谷草轉氨酶（GOT)測試盒

谷草轉氨酶（GOT)測試盒

合成酶（GS)測試盒
乳腺癌血管周細胞色含量測試盒

色胺（Try）含量試劑盒

ELISA檢測試劑盒

沙拉沙星殘留ELISA測試盒（抗生素殘留）

鯊魚elisa分析檢測試劑盒