冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。

產品屬性：

名稱    小鼠淋巴結淋巴細胞
2.組織來源：淋巴結

3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

小鼠淋巴結淋巴細胞分離自淋巴結；淋巴結是哺乳類*的周圍淋巴器官,，由淋巴細胞集合而成,。呈豆形，位于淋巴管行進途中,，是產生免疫應答的重要器官之一,。淋巴結表面包有被膜，被膜的結締組織伸入淋巴結內形成小梁,，構成淋巴結的支架,。被膜下為皮質區(qū)，淋巴結的中心及門部為髓質區(qū),。皮質區(qū)有淋巴小結,、彌散淋巴組織和皮質淋巴竇（簡稱皮竇），髓質包括由致密淋巴組織構成的髓索和髓質淋巴竇（簡稱髓竇）,。淋巴竇的竇腔內有許多淋巴細胞和巨噬細胞,，從輸入淋巴管流來的淋巴液先進入皮竇再流向髓竇，后經輸出淋巴管離開淋巴結,。淋巴結的主要功能是濾過淋巴液,，產生淋巴細胞和漿細胞，參與機體的免疫反應,。淋巴結腫大或疼痛常表示其屬區(qū)范圍內的器官有炎癥或其他病變,。主要功能是濾過淋巴液,，產生淋巴細胞和漿細胞，參與機體的免疫反應,；當局部感染時,，細菌、病毒或癌細胞等可沿淋巴管侵入,，引起局部淋巴結腫大,。如該淋巴結不能阻止和消滅它們，則病變可沿淋巴管的流注方向擴散和轉移,。淋巴結淋巴細胞是白細胞的一種,，由次級淋巴器官淋巴結產生，是機體免疫應答功能的重要細胞成分,；細胞為圓形細胞核,，細胞質少。成熟淋巴細胞需依賴抗原刺激而分化增殖,，繼而發(fā)揮其免疫功能,。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠淋巴結淋巴細胞采用分離淋巴結組織、研磨獲取單細胞懸液后通過密度梯度離心法制備而來,，細胞總量約為1×10?cells/瓶,。

6.質量檢測：

公司實驗室分離的小鼠淋巴結淋巴細胞經過檢測，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態(tài) 圓形

傳代特性 不增殖,；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細胞,，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%,，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,，注意凍 存管做好標識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
軟骨 RNAout50 次  柱式真菌 RNA-DNA 雙提試劑盒50 次

柱式軟骨 RNAout50 次  柱式真菌 DNAout50 次

石蠟包埋組織 RNAout30 次  柱式藻類 RNAout50 次

免 RNA 提取 FFPE RT-PCR 試劑盒30 次  柱式血液 RNAout50 次

柱式昆蟲 RNAout50 次  柱式血液 mtDNAout，測序級10 次
猴促腎上腺皮質激素(ACTH)elisa分析檢測試劑盒

猴促腎上皮質激素釋放激素(CRH)elisa分析檢測試劑盒

猴超敏C反應蛋白(hs-CRP)elisa分析檢測試劑盒

猴補體片斷3b(C3b)elisa分析檢測試劑盒

猴補體蛋白5(C5)elisa分析檢測試劑盒
小鼠淋巴結淋巴細胞絲裂原激活的蛋白/MAP(MAPK)elisa檢測試劑盒

絲狀真菌蛋白提取試劑盒（2D電泳用）100T

絲狀真菌蛋白提取試劑盒（2D電泳用）50T

絲狀真菌蛋白提取試劑盒100T

絲狀真菌蛋白提取試劑盒50T
實驗報告：
產品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。