我司全程提供細(xì)胞生物體,、生長(zhǎng)特性,、來(lái)源、器官,、類(lèi)型、形態(tài)、培養(yǎng)條件,、應(yīng)用、組織,、凍存條件等復(fù)蘇及凍存細(xì)胞株說(shuō)明書(shū)信息,，我們專(zhuān)業(yè)您的細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)，讓您實(shí)驗(yàn)再無(wú)煩擾,！產(chǎn)品僅用于科研

名稱(chēng)    胃癌組織成纖維細(xì)胞
2.組織來(lái)源：胃癌組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人胃癌組織源成纖維細(xì)胞分離自患有胃癌病人的胃癌組織,；胃癌（gastric carcinoma）是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，在我國(guó)各種惡性腫瘤中發(fā)病率居,，胃癌可發(fā)生于胃的任何部位,，其中半數(shù)以上發(fā)生于胃竇部，胃大彎,、胃小彎及前后壁均可受累,，絕大多數(shù)胃癌屬于腺癌。在胃癌侵襲和轉(zhuǎn)移的過(guò)程中，涉及諸多復(fù)雜的過(guò)程,，如細(xì)胞外基質(zhì)的硬化和降解,、新生血管的形成等，而這些過(guò)程會(huì)直接或間接的引起腫瘤微環(huán)境（Tumor mircoenvironment）的改變,。腫瘤微環(huán)境即腫瘤細(xì)胞生存的外部環(huán)境,，由不同種類(lèi)的非腫瘤性的細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellular matrix，ECM）構(gòu)成,，包括纖維細(xì)胞,，免疫細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞,，間充質(zhì)干細(xì)胞等,，腫瘤細(xì)胞通過(guò)調(diào)控這些間質(zhì)細(xì)胞，創(chuàng)造出有利于自身侵襲轉(zhuǎn)移的條件,，從而使得腫瘤得到進(jìn)展,。越來(lái)越多的證據(jù)表明，腫瘤微環(huán)境的改變?cè)谀[瘤進(jìn)展中扮演著重要的角色,。在腫瘤微環(huán)境中,，研究多也是主要的間質(zhì)細(xì)胞是腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（cancer-associated fibroblasts, CAFs）。CAFs 主要由腫瘤周邊的正常成纖維細(xì)胞和成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞演化而來(lái),。胃癌組織源成纖維細(xì)胞多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯,。剛分離的胃癌組織源成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開(kāi)始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細(xì)胞基本貼壁*,，伸展成梭形，胞核清晰,，分布較均勻，散在生長(zhǎng),，不聚集成團(tuán),；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài),，細(xì)胞排列緊密,，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦,、胞體較大,，細(xì)胞質(zhì)透明,，細(xì)胞核較大，呈橢圓形,，顏色淡,。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。

5.方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人胃癌組織成纖維細(xì)胞采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人胃癌組織成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右,；3代以?xún)?nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控,、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu),、生命活動(dòng)等,。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度,、氧氣,、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理,、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞,，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化,。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察,、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學(xué),、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備,。

使用方法：
收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,，75%酒精消毒,，拆下封口膜，放入37℃,，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.125%胰消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,，37℃溫浴3min左右,；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,，再加入*培養(yǎng)液終止消化,；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基,。
鼠李糖發(fā)酵管5ml 30 支/盒   改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基200ml

血鏈球菌   淺灰鏈霉菌杭州變種

蘇云金芽胞桿菌殺蟲(chóng)亞種 Bacillus thuringiensis subsp. entomocidus   嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌

產(chǎn)紫青霉   小紅酵母

南方樹(shù)舌   土星漢遜酵母
檸檬酸CA含量測(cè)試盒 50T/48樣 比色法

磷酸果糖激酶PFK測(cè)試盒 50T/48樣 紫外比色法

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PEPC測(cè)試盒 50T/48樣 紫外比色法

磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶PEPCK試劑盒 50T/48樣 紫外比色法

NADPH-還原酶NCR測(cè)試盒 50T/48樣 比色法
胃癌組織成纖維細(xì)胞小鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠Ⅳ型膠原(COL4)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠Ⅳ型膠原α1(COL4α1)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠Ⅴ型膠原α2(COL5α2)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠Ⅵ型膠原α1(COL6α1)elisa檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO,，貨號(hào)21875-091)，90%,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存,。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM,，常溫條件下離心5分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。