冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。

產(chǎn)品屬性：

名稱    大鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞
2.組織來源：骨骼肌組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

大鼠骨骼肌細(xì)胞分離自四肢肌肉組織,；骨骼肌又稱橫紋肌,，肌肉中的一種,，約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長柱形的多核細(xì)胞,，肌膜的外面有基膜緊密貼附,。屬于橫紋肌，橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌,，其中骨骼肌主要分布于四肢,。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的器官,，有豐富的血管,、淋巴分布，在軀體神經(jīng)支配下收縮或舒張,，進(jìn)行隨意運動,。肌肉可根據(jù)共形狀、大小,、位置,、起止點、纖維方向和作用等命名,。依形態(tài)命名的如斜方肌,、菱形肌、三角肌,、梨狀肌等,。骨骼肌細(xì)胞呈纖維狀，不分支,，有明顯橫紋,，核很多,，且都位于細(xì)胞膜下方。肌細(xì)胞內(nèi)有許多沿細(xì)胞長軸平行排列的細(xì)絲狀肌原纖維,。每一肌原纖維都有相間排列的明帶（Ⅰ帶）及暗帶（A帶）,。明帶染色較淺，而暗帶染色較深,。暗帶中間有一條較明亮的線稱H線,。H線的中部有一M線。明帶中間,，有一條較暗的線稱為Z線,。兩個Z線之間的區(qū)段，叫做一個肌節(jié),。骨骼肌細(xì)胞也稱橫紋肌細(xì)胞,，細(xì)胞呈纖維狀，不分支,，有明顯橫紋,，核很多，且都位于細(xì)胞膜下方,，細(xì)胞多呈梭行,，具有一定的方向性。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的大鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,，注意凍 存管做好標(biāo)識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。
蘇云金芽孢桿菌戈爾斯德變種   清酒酵母

構(gòu)巢裸胞殼   糞腸球菌

熱帶念珠菌凍干粉   豇豆慢生根瘤菌

粉紅寄生菌   平蓋靈芝（樹舌）

蘇云金芽胞桿菌亞毒亞種 Bacillus thuringiensis subsp. subtoxicus   蝕脈鐮孢霉
犬Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)elisa分析檢測試劑盒

犬Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)elisa分析檢測試劑盒

犬25羥基D3(25 HVD3)elisa分析檢測試劑盒

犬2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)elisa分析檢測試劑盒

犬17羥孕酮(17-OHP)elisa分析檢測試劑盒
大鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞小鼠GTP酶 KRas elisa分析檢測試劑盒

小鼠GTP酶 KRas elisa檢測試劑盒

小鼠G蛋白β1(GNβ1)elisa檢測試劑盒

小鼠G蛋白偶聯(lián)雌激素受體1(GPER)elisa檢測試劑盒

小鼠G蛋白偶聯(lián)膽汁酸受體1(GPBAR1)elisa分析檢測試劑盒
實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。