培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,，注意凍 存管做好標(biāo)識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

產(chǎn)品屬性：

名稱    小鼠海綿體平滑肌細(xì)胞
2.組織來源：海綿體組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

小鼠海綿體平滑肌細(xì)胞分離自海綿體組織,；海綿體,，又稱海綿體肌，是硬的平滑肌和結(jié)締組織,。海綿體是一種勃起組織,，外面包有堅厚的白膜，內(nèi)部由結(jié)締組織和平滑肌組成海綿狀支架,，其腔隙與血管相通,。它主要包括海綿體內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞3種細(xì)胞成分,。其中平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞鑲嵌于海綿體細(xì)胞外基質(zhì)的膠原中,，在消化海綿體組織時,，膠原酶的作用主要是松解海綿體內(nèi)皮細(xì)胞與基膜的聯(lián)系，破壞海綿體內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接,。因此可用膠原酶分離出海綿體平滑肌細(xì)胞,。平滑肌，是非橫紋肌的肌肉組織,。分布在人體動脈和靜脈血管壁,、膀胱、子宮,、男性和女性生殖道,、消化道、呼吸道,、眼睛的睫狀肌和虹膜,。平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展,，細(xì)胞形態(tài)大小不一,，呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中,；2周后細(xì)胞匯合,，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富,，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏,；細(xì)胞密度低時,，常交織成網(wǎng)狀；密度高時,，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn),。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠海綿體平滑肌細(xì)胞采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的小鼠海綿體平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
蘇云金芽胞桿菌莫里遜亞種 Bacillus thuringiensis subsp. Morrisoni   乳酸鏈球菌

多頭被孢   玫瑰色鏈霉菌

云芝   酮叢毛單胞菌

洛格酵母   鮑氏志賀菌CMCC51522凍干粉南京便診

糞腸球菌(糞鏈球菌)   運(yùn)動發(fā)酵單孢菌
人1,25二羥基D3(1,25 DHVD3)elisa分析檢測試劑盒

人 Liprin alpha 1 elisa分析檢測試劑盒

人 KIAA1199 elisa分析檢測試劑盒

犬elisa分析檢測試劑盒

犬肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)elisa分析檢測試劑盒
小鼠海綿體平滑肌細(xì)胞小鼠SCAF11蛋白(SFRS2IP/CASP11)elisa分析檢測試劑盒

小鼠SCAF11蛋白(SFRS2IP/CASP11)elisa檢測試劑盒

小鼠Sestrin小鼠1蛋白(SESN1)elisa檢測試劑盒

小鼠Sestrin小鼠2蛋白(SESN2)elisa檢測試劑盒

小鼠Sestrin小鼠3蛋白(SESN3)elisa檢測試劑盒

冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。