冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí),， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。

圖產(chǎn)品屬性：

名稱    大鼠胰腺腺泡細(xì)胞
2.組織來源：胰腺組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

大鼠胰腺腺泡細(xì)胞分離自胰腺組織,；胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成,，腺泡分泌胰液,，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有,、原,、脂肪酶、等,。胰液通過胰腺管排入十二指腸,，有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用,。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)──胰島所組成,，胰島主要由4種細(xì)胞組成：α細(xì)胞、β細(xì)胞,、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞,。α細(xì)胞分泌胰高血糖素，升高血糖,；β細(xì)胞分泌胰島素,，降低血糖；γ細(xì)胞分泌,，以旁分泌的方式抑制α,、β細(xì)胞的分泌；PP細(xì)胞分泌胰多肽,，抑制胃腸運(yùn)動(dòng),、胰液分泌和膽囊收縮。胰腺泡主要由錐體形的腺泡細(xì)胞組成,，與閏管相連,，外有基膜，為典型的蛋白質(zhì)分泌細(xì)胞,。胰腺泡可分泌多種消化酶,，如原,、胰糜原、胰,、胰脂肪酶,、DNA 酶和RNA 酶等，分別消化食物中的營養(yǎng)成分 ,；胰腺泡也分泌抑制因子,，防止兩種原被激活，腺泡腔內(nèi)有泡心細(xì)胞,，扁平或立方形,，色淺，是閏管起始部的上皮細(xì)胞,，為胰腺腺泡的特點(diǎn),。

5.方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胰腺腺泡細(xì)胞采用膠原酶消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胰腺腺泡細(xì)胞經(jīng)亞甲基藍(lán)染色檢測,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細(xì)胞形態(tài) 圓形

傳代特性 不增殖,；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí),。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱,，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。
蘇云金芽胞桿菌庫爾斯塔克亞種 Bacillus thuringiensis subsp. Kurstaki   點(diǎn)頭根霉

兩型孢毛霉   木醋桿菌

斑褶菇   解脂假絲酵母

蘇云金芽胞桿菌蠟螟亞種Bacillusthuringiensissubsp.galleriae   白色念珠菌凍干粉

平蓋靈芝(樹舌)   雜色曲霉
犬S100B蛋白(S100B)elisa分析檢測試劑盒

犬P選擇素(SELP)elisa分析檢測試劑盒

犬P物質(zhì)受體(TACR1)elisa分析檢測試劑盒

犬N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)elisa分析檢測試劑盒

犬N端前心鈉肽(NT-ProANP)elisa分析檢測試劑盒
大鼠胰腺腺泡細(xì)胞小鼠MAP激酶活化蛋白激酶2(MAPKAPK2)elisa檢測試劑盒

小鼠MAP激酶活化蛋白激酶2(MAPKAPK2)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測

小鼠Mdm2小鼠p53結(jié)合蛋白同源物(MDM2)elisa檢測試劑盒

小鼠Misato同源物1(MSTO1)elisa檢測試劑盒

小鼠M型肌酸激酶(CKM)elisa分析檢測試劑盒
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。