產(chǎn)品屬性：

名稱    大鼠主動脈外膜成纖維細胞
2.組織來源：主動脈組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

大鼠主動脈外膜成纖維細胞分離自主動脈血管外膜組織,；血管外膜是由疏松結(jié)締組織組成,，其中含螺旋狀或縱向分布的彈性纖維和膠原纖維,。血管壁的結(jié)締組織細胞以成纖維細胞為主,，當血管受損傷時，成纖維細胞具有修復外膜的能力,。有的動脈中膜和外膜的交界處,，有密集的彈性纖維組成的外彈性膜,。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來,。成纖維細胞較大,，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,，細胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下,，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用,。剛分離的血管外膜成纖維細胞呈圓形,、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細胞基本貼壁*,，伸展成梭形，胞核清晰,，分布較均勻,，散在生長，不聚集成團,；細胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密,，有的交叉重疊生長,，平坦、胞體較大,，細胞質(zhì)透明,，細胞核較大，呈橢圓形,，顏色淡,。細胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。血管外膜成纖維細胞是血管外膜的主要組成細胞之一,，其主要生理功能合成和釋放細胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠主動脈外膜成纖維細胞采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的大鼠主動脈外膜成纖維細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3-5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
蘇云金芽胞桿菌蘇云金變種 Bacillus thuringeinsis subsp. thuringeinsis   金龜子綠僵菌

發(fā)酵性酵母   植物乳桿菌(胚芽乳桿菌)

天藍色鏈霉菌   巴西毛殼

李克犁頭霉或傘枝梨頭霉   凍干粉

凝結(jié)芽孢桿菌   產(chǎn)朊假絲酵母
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