產(chǎn)品屬性：

組織來源：牙髓組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人牙髓干細(xì)胞分離自滑膜組織,；牙髓組織位于牙齒內(nèi)部的牙髓腔內(nèi),。牙髓腔的外形與牙體形態(tài)大致相似,，牙冠部髓腔較大,，稱髓室,，牙根部髓腔較細(xì)小,，稱根管，根尖部有小孔,，稱根尖孔。牙髓組織主要包含神經(jīng),、血管,，淋巴和結(jié)締組織，還有排列在牙髓外周的造牙本質(zhì)細(xì)胞,，其作用是造牙本質(zhì),。牙髓因受到病源刺激物的作用不同以及機(jī)體抵抗力的差異,，出現(xiàn)不同的病理變化，在臨床上會(huì)表現(xiàn)為一系列不同的癥狀和體征,。牙髓充血狀況持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)后,，轉(zhuǎn)化為急性牙髓炎癥。間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,，MSCs）來源于胚胎時(shí)期的中胚層組織,，具有很強(qiáng)的自我復(fù)制和多向分化潛能，具有向脂肪細(xì)胞,、成骨細(xì)胞,、軟骨細(xì)胞及肌細(xì)胞等多種終末細(xì)胞定向分化的能力，運(yùn)用 MSCs來修復(fù)軟骨損傷具有很好的應(yīng)用前景,，目前已能夠從骨髓,、脂肪、滑膜,、骨骼,、肌肉等組織以及羊水、臍帶,、臍帶血中分離和制備間充質(zhì)干細(xì)胞,。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的采用膠原酶消化法、低密度稀釋克隆制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含F(xiàn)BS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3-5代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

冷凍保存細(xì)胞之方法,？

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30分鐘*） → -80 ℃16~18小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。-20 ℃不可超過1小時(shí),， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25瓶為類,；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗一遍后加入1ml ,，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。

2. 4min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,，輕輕混勻，DMSO終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱，2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

產(chǎn)品僅用于科研：

一、分離與培養(yǎng)：

1,、無菌條件下,，取出1-3d齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大?。?/p>

2,、往組織塊中加入4mL酶消化液（0.1%和0.1%I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10%FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；

3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織被消化,；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),。
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；

3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4%BSA封閉細(xì)胞30min；

4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,，37℃條件下放置1h,；

6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
血管緊張素Ⅱ抗體

血管緊張素Ⅱ受體1抗體

血管生成素-1抗體

血管生成素樣蛋白2抗體

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