冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。

產(chǎn)品屬性：

名稱    大鼠肌腱成纖維細胞
2.組織來源：肌腱組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

大鼠肌腱成纖維細胞分離自肌腱組織；肌腱是肌腹兩端的索狀或膜狀致密結締組織,，便于肌肉附著和固定。一塊肌肉的肌腱分附在兩塊或兩塊以上的不同骨上,，是由于肌腱的牽引作用才能使肌肉的收縮帶動不同骨的運動。每一塊骨骼肌都分成肌腹和肌腱兩部分,，肌腹由肌纖維構成，色紅質軟,，有收縮能力，肌腱由致密結締組織構成,，色乳白較硬，沒有收縮能力,。肌腱把骨骼肌附著于骨骼。長肌的肌腱多呈圓索狀,，闊肌的肌腱闊而薄，呈膜狀,，又叫腱膜,。此處的肌腹即為通常所說的紅肌,，而肌腱即為白肌，分別控制肌肉的力量,、爆發(fā)力和耐力,。成纖維細胞是疏松結締組織的主要細胞成分,，由胚胎時期的間充質細胞分化而來；成纖維細胞較大,，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下,，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性,、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細胞呈圓形,、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形,，胞核清晰,，分布較均勻,，散在生長，不聚集成團,；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài),，細胞排列緊密,，有的交叉重疊生長,，平坦,、胞體較大，細胞質透明,，細胞核較大，呈橢圓形,，顏色淡,。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠肌腱成纖維細胞采用混合膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠肌腱成纖維細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
通用型 RT-LAMP 試劑盒50 次  電泳級酚藍溶液10mL

LAMP 擴增陽性對照50 次  電泳級尿素100g

LAMP 可見光染料1mL  電泳級耐熱型 SYBR 染料50μL

核酸稀釋液,，測 OD 專用100mL  電泳級甲叉雙丙 25g

天凈沙 Ribo-SPIA cDNA 擴增試劑盒20 次  電泳級過0.1gx10
人ES1蛋白同系物，線粒體(C21orf33/HES1/KNPI)elisa分析檢測試劑盒

人Ephrin-B2(EFNB2)elisa分析檢測試劑盒

人EJ抗體/抗甘氨酰tRNA合成酶抗體(EJ/GlyRS)elisa分析檢測試劑盒

人Egl九同源物1(EGLN1/C1orf12/PNAS-118/PNAS-137)elisa分析檢測試劑盒

人EB病毒早期抗原(EBEA)抗體(IgG)elisa分析檢測試劑盒
大鼠肌腱成纖維細胞小鼠白細胞激活黏附因子(ALCAM)elisa檢測試劑盒

小鼠白細胞介素10(IL-10)elisa檢測試劑盒

小鼠白細胞介素12(IL-12/P40)elisa檢測試劑盒

小鼠白細胞介素12(IL-12/P70)elisa檢測試劑盒

小鼠白細胞介素13(IL-13)elisa檢測試劑盒
實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將成1mm3左右大??；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。