冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。

產(chǎn)品屬性：

名稱    大鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞
2.組織來源：腎上腺組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

大鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞分離自腎上腺組織；腎上腺是人體相當(dāng)重要的內(nèi)分泌器官,，由于位于兩側(cè)腎臟的上方,，故名腎上腺。腎上腺左右各一,，位于腎的上方,，共同為腎筋膜和脂肪組織所包裹。左腎上腺呈半月形,，右腎上腺為三角形,。從側(cè)面觀察，腺體分腎上腺皮質(zhì)和腎上腺髓質(zhì)兩部分,，周圍部分是皮質(zhì),，內(nèi)部是髓質(zhì),。腎上腺內(nèi)部是髓質(zhì)部分，分泌腎上和,。這些激素在應(yīng)激狀態(tài)釋放增多,，能夠幫助升高血壓，加快心率,，升高血糖,，動(dòng)員全身的儲(chǔ)備物質(zhì)，為機(jī)體與外界環(huán)境的抗?fàn)幾骱贸浞譁?zhǔn)備,。腎上腺外部是皮質(zhì)部分,，分泌醛固酮、和少量的雌雄激素,。醛固酮能夠促進(jìn)小便中尿鉀的排出和尿鈉的重吸收,，正常數(shù)量的醛固酮，對(duì)維持人體正常血壓有重要作用,。但是如果過多分泌,，會(huì)導(dǎo)致高血壓和低血鉀。是人體必需的激素之一,。當(dāng)人體處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí),，比如感冒，發(fā)燒,，遇到突發(fā)事件的時(shí)候,，腎上腺皮質(zhì)分泌大量的，這些能夠動(dòng)員機(jī)體的存儲(chǔ)能源,，為應(yīng)對(duì)內(nèi)部或者外部重要事件提供充分的物質(zhì)準(zhǔn)備,。當(dāng)缺乏時(shí)，機(jī)體在遇到重大事件的時(shí)候,，往往缺乏足夠應(yīng)對(duì)能力,，容易被病毒或外界壓力所擊倒。腎上腺產(chǎn)生的雄激素,，對(duì)男性來講,，但是對(duì)女性而言，是雄激素的一個(gè)重要來源,。

5.方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞采用膠原酶消化法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞經(jīng)3β-HSD免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形,、多角形

傳代特性 可傳1-3代左右；2代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí),。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
填入法 DNA 末端標(biāo)記試劑盒 C5次  接頭 DNA(Sal I-Sma I)5nmol

DNA 5’末端標(biāo)記試劑盒10 次  接頭 DNA(pSma I)5nmol

dNTP 溶液 ( 標(biāo)記專用 )0.5mL  接頭 DNA(Hind Ⅲ -Sma I)5nmol

標(biāo)記 dUTP 溶液50μL  接頭 DNA(EcoR I-Sma I)5nmol

Aminoally-dUTP 溶液，10mM100μL  接頭 DNA(BamH I(Bgl II)-Sma I)5nmol
人EB病毒核抗原3A抗體(IgG)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測

人EB病毒核抗原1(EBNA1)抗體(IgG)elisa檢測試劑盒

人EB病毒IgA(EBv IgA)elisa檢測試劑盒

人EB病毒(Ebv)抗體(IgM)elisa檢測試劑盒

人EB病毒(EBv)抗體(IgG)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測
大鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞小鼠白介素9(IL-9)elisa分析檢測試劑盒

小鼠白介素9(IL9)elisa檢測試劑盒

小鼠白介素9(IL-9)elisa檢測試劑盒

小鼠白三烯A4水解酶(LTA4H)elisa檢測試劑盒

小鼠白三烯B4(LTB4)elisa分析檢測試劑盒
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。