冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。

產(chǎn)品屬性：

名稱    大鼠羊膜胚胎細(xì)胞
2.組織來源：胎盤組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

大鼠胚胎羊膜細(xì)胞分離自羊膜組織；羊膜為單層上皮細(xì)胞互相連接構(gòu)成的薄膜,。單層上皮細(xì)胞具有分泌羊水的作用,。隨著胚胎的生長發(fā)育，羊膜與絨毛密切緊貼,，形成胎膜,。胎膜隨著羊膜腔逐漸擴大而呈半透明的薄膜，無血管,，富有韌性（胎膜也就是羊膜腔的囊壁）,。羊膜腔內(nèi)充滿的液體為羊水。羊膜僅覆蓋在胎盤的兒體面,，并不深入胎盤組織中,，隨著的進(jìn)展羊膜腔逐漸擴大，占據(jù)整個子宮腔,，羊膜是胎膜內(nèi)一層,，是一層半透明的薄膜，與覆蓋在胎盤,、臍帶的羊膜層相連接,。羊膜是胎盤的內(nèi)層，與人眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似,，含有眼表上皮細(xì)胞,，包括結(jié)膜細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞生長所需要的物質(zhì)，其光滑,，無血管,、神經(jīng)及淋巴，具有一定的彈性,，厚0.02~0.5mm,，在電鏡下，其分為五層：上皮層,、基底膜,、致密層、纖維母細(xì)胞層和海綿層,，羊膜基底膜和羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元,，主要為i、iii,、iv,、v、vii型膠原和纖維粘連蛋白,、層粘連蛋白等成份,，正是這些成份使羊膜可以充當(dāng)“移植的基底膜"而發(fā)揮一種新的健康合適的基質(zhì),。羊膜細(xì)胞主要由羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)細(xì)胞組成，均具有多分化潛能,，可轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元,，且還有合成、釋放生物活性物質(zhì)和神經(jīng)營養(yǎng)因子的功能,。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠羊膜胚胎細(xì)胞采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的大鼠羊膜胚胎細(xì)胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形,、多角形

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,，注意凍 存管做好標(biāo)識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。
天凈沙核酸濃縮劑30mL  免質(zhì)粒提取篩選試劑盒1000 次

柱式 RNA 純化試劑盒50 次  免疫蛋白清除劑20 次

低載量 PCR 片段純化試劑盒50 次  免 RNA 提取 RT-PCR 試劑盒 100 次

低載量 PCR 片段純化試劑盒100 次  免 RNA 提取 FFPE RT-PCR 試劑盒30 次

高載量 PCR 片段純化試劑盒50 次  免 DNA 提取 PCR 試劑盒100 次
人CXC趨化因子受體7(CXCR7)elisa分析檢測試劑盒

人CXC趨化因子受體4(CXCR4)elisa分析檢測試劑盒

人CXC趨化因子受體3(CXCR3)elisa分析檢測試劑盒

人CXC趨化因子配體16(CXCL16)elisa分析檢測試劑盒

人c-sis elisa分析檢測試劑盒
大鼠羊膜胚胎細(xì)胞小鼠白介素2可溶性受體α鏈(sIL-2Rα/CD25)elisa分析檢測試劑盒

小鼠白介素2可溶性受體α鏈(sIL-2Rα/CD25)elisa檢測試劑盒

小鼠白介素2可溶性受體α鏈(sIL-2Rα/CD25)elisa檢測試劑盒免費代測

小鼠白介素2受體(IL-2R)elisa檢測試劑盒

小鼠白介素2受體α(IL2Rα)elisa檢測試劑盒
實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大小；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。