詳細(xì)介紹
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,,加入約 8ml 培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過(guò)夜),。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,,細(xì)胞變圓 脫 落后,,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,,輕輕混勻,,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80 度冰箱,,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號(hào) | GOY-01X1376 |
名稱 小鼠羊膜間質(zhì)細(xì)胞
2.組織來(lái)源:胎盤組織
3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡(jiǎn)介:
小鼠羊膜間質(zhì)細(xì)胞分離自胎盤組織,;胎盤(placenta)是哺乳動(dòng)物期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長(zhǎng)成的母子間交換物質(zhì)的過(guò)渡性器官,由羊膜,、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成,。胎兒在子宮中發(fā)育,依靠胎盤從母體取得營(yíng)養(yǎng),,而雙方保持相當(dāng)?shù)莫?dú)立性,。胎盤還產(chǎn)生多種維持的激素,,是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代,,胚胎生長(zhǎng)出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊,、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合,以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換,,這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤,。羊膜是胎盤的內(nèi)層,與眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似,,含有眼表上皮細(xì)胞,,包括結(jié)膜細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的物質(zhì),其光滑,,無(wú)血管,、神經(jīng)及淋巴,具有一定的彈性,;在電鏡下,,其分為五層:上皮層、基底膜,、致密層,、纖維母細(xì)胞層和海綿層,羊膜基底膜和羊膜羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元,,主要為Ⅰ、Ⅲ,、Ⅳ,、Ⅴ、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白,、層粘連蛋白等成份,。羊膜細(xì)胞主要由羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)細(xì)胞組成,均具有多分化潛能,,可轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元,,且還有合成、釋放生物活性物質(zhì)和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的功能,。
5.方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠羊膜間質(zhì)細(xì)胞采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來(lái),,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
6.質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠羊膜間質(zhì)細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
7.培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h,;
6,、用PBS沖洗3次,,每次10min,,后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
銅綠假單胞菌凍干粉 耐久腸球菌(堅(jiān)韌鏈球菌)
構(gòu)巢裸胞殼 保加利亞乳桿菌
沼澤紅假單胞菌 膠紅酵母
細(xì)黃鏈霉菌 橄欖包毛殼
干酪乳桿菌干酪亞種 香蕉枯萎病
人ICOS配體(ICOSLG)elisa分析檢測(cè)試劑盒
人ICE激活因子(IRAP)elisa分析檢測(cè)試劑盒
人I 型膠原蛋白(COL I)elisa分析檢測(cè)試劑盒
人H-鈣粘著蛋白/H-鈣粘連蛋白(H-Cad/CDH13)elisa分析檢測(cè)試劑盒
人HSP60 IgM抗體elisa分析檢測(cè)試劑盒
小鼠羊膜間質(zhì)細(xì)胞小鼠苯丙(LPA)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
小鼠苯酚磺基轉(zhuǎn)移酶(PST)elisa檢測(cè)試劑盒
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小鼠表睪酮(ET)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白A(SPA)elisa檢測(cè)試劑盒
冷凍保存細(xì)胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí),, 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些,。