培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細胞,，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%,，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,，注意凍 存管做好標識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

產(chǎn)品屬性：

名稱    小鼠浦肯野細胞
2.組織來源：小腦組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

小鼠浦肯野細胞分離自小腦皮質組織,；小腦的表面被覆著一層灰質,，叫小腦皮質，小腦皮質分為3層,，從表及里分別為分子層,、浦肯野細胞層和顆粒細胞層。皮質里含有星狀細胞,、籃狀細胞,、浦肯野細胞、高爾基細胞和顆粒細胞等5種神經(jīng)元,。浦肯野細胞發(fā)出的軸突組成小腦皮質的傳出纖維,，終止于小腦白質內的神經(jīng)核。浦肯野細胞（Purkinje cell）是從小腦皮質發(fā)出的能夠傳出沖動的神經(jīng)元,。人的小腦皮質約有1500萬個浦肯野細胞,。浦肯野細胞還廣泛分布于心室。顯著的電生理特點是傳導性強,，傳導速度快,，可達4000mm/s。屬快反應自律型細胞,，具有舒張期自動除極化的性能,，因而有自律性，但自律性強度明顯低于竇房結P細胞,。這類細胞常常平行排列，細胞內電阻低,，只有心室細胞的1/3,。小腦：浦肯野細胞是小腦皮質中大的神經(jīng)元，細胞體呈梨形,，頂端發(fā)出2~3條粗大的主樹突,，向外伸入分子層。主樹突沿途分支繁茂，形如展開的,、扁薄的扇形,，鋪展在與小腦葉片長軸垂直的平面上。樹突分支上有大量的樹突棘,，與傳入纖維構成廣泛的突觸聯(lián)系,，接受傳入小腦的全部信息。軸突由細胞底部（與主樹突相對方向）發(fā)出,，細長,，離開胞體不遠便形成有髓神經(jīng)纖維，向內經(jīng)顆粒層離開皮質進入白質,，組成小腦皮質的傳出纖維,，終止于小腦內部的神經(jīng)核團。一個浦肯野細胞的軸突約形成500個終末膨大,，約與小腦深部核團的35個神經(jīng)元形成突觸,。心臟浦肯野細胞常常平行排列，幾個細胞互相以漿膜連接排成一個小束,，小束外包繞著基底膜,。細胞內含肌原纖維很少，胞漿區(qū)內充滿糖原顆粒,、線粒體和肌漿網(wǎng),，細胞內電阻低，只有心室細胞的1/3,。浦肯野細胞內無橫管系統(tǒng),，但膜電容比收縮細胞大，可能是由于其閏盤結構廣泛而復雜,，提供了較大的表面積的緣故,。浦肯野細胞閏盤的主要成分是縫隙連接，粒著膜占的比例很少,，這些可能是構成浦肯野細胞傳導快的形態(tài)學基礎,。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠浦肯野細胞采用消化法結合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基、化學試劑抑制法篩選制備而來,，細胞總量約為5×105cells/瓶

6.質量檢測：

公司實驗室分離的小鼠浦肯野細胞經(jīng)Neph3免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含脂質濃縮液、BSA,、Monothioglycerol,、Transferrin、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 神經(jīng)元細胞樣

傳代特性 不增殖,；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
兔抗 GST 標簽多抗20μL  RNA 級 Tris Base( 三羥甲基氨基 )100g

HRP 標記的兔抗 GST 標簽多抗20μL  RNA 級 SDS( 十二烷基硫酸 )100g

一站式 MBP 標簽蛋白純化套裝20 次  RNA 級 Sarkosyl( 月桂酰 -N- 甲基氨基乙酸 ) 100g

小鼠抗 His 標簽單抗100μL  RNA 級 PVP K30( 聚乙烯基烷酮 K30) 100g

小鼠抗 His 標簽單抗1000μL  RNA 級 Oligo(dT) 纖維素25mg
人α1抗胰糜(AACT)elisa分析檢測試劑盒

人α1抗(α1-AT)elisa分析檢測試劑盒

人α1防御素(DEFA1)elisa分析檢測試劑盒

人α1β糖蛋白(α1β-GP)elisa分析檢測試劑盒

人α/β干擾素受體(IFN-α/βR)elisa分析檢測試劑盒
小鼠浦肯野細胞小鼠蛋白激酶Cζ(PKCζ)elisa檢測試劑盒

小鼠蛋白激酶Cη(PKCη)elisa檢測試劑盒

小鼠蛋白激酶D1(PRKD1)elisa檢測試劑盒

小鼠蛋白激酶N2(PKN2)elisa檢測試劑盒

小鼠蛋白激酶抑制因子β(PKIβ)elisa檢測試劑盒

冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。