培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%,，細胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

產(chǎn)品屬性：

名稱    小鼠真皮毛乳頭細胞
2.組織來源：皮膚組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

小鼠真皮毛乳頭細胞分離自皮膚毛囊組織,；毛囊是表皮細胞連續(xù)形成的袋樣上皮,。其基底是真皮凹進的真皮毛乳頭，中心是一根毛發(fā),，立毛肌的一側(cè)斜附在毛囊壁上,，附著點的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸，毛囊在皮膚表面的開口是毛囊孔,。毛囊位于真皮和皮下組織中,，毛囊向下伸入真皮約有一厘米深度，它是由包繞毛發(fā)與表皮相連的上皮鞘,，以及皮脂腺和立毛肌所組成的一個結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的器官附件組織,。毛囊實際上是由結(jié)締組織和上皮兩部分所組成，除了具有結(jié)締組織和血管的真皮乳頭（毛乳頭）外,，毛囊其余部分都是由表皮細胞分化而來,。真皮毛乳頭細胞位于毛囊基底部，是一類成纖維細胞,。在毛囊發(fā)育早期,，真皮細胞向單層上皮細胞發(fā)出第一真皮信號，刺激上皮局部形成毛基板,。隨后毛基板細胞向下方的真皮發(fā)出第一表皮信號,，誘導(dǎo)其形成有成纖維細胞組成的凝集細胞團。在此過程中,，毛母質(zhì)細胞逐漸包裹凝集細胞團,，形成成熟的真皮毛乳頭細胞。作為毛囊中的重要細胞群，真皮毛乳頭細胞的分子機制和臨床應(yīng)用正在被逐漸認識和解析,。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠真皮毛乳頭細胞采用膠原酶-中性混合消化法制備而來,，細胞總量約為5×105cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的小鼠真皮毛乳頭細胞經(jīng)層粘連蛋白免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次；

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形,、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
兔抗 GST 標簽多抗20μL  RNA 級 Tris Base( 三羥甲基氨基 )100g

HRP 標記的兔抗 GST 標簽多抗20μL  RNA 級 SDS( 十二烷基硫酸 )100g

一站式 MBP 標簽蛋白純化套裝20 次  RNA 級 Sarkosyl( 月桂酰 -N- 甲基氨基乙酸 ) 100g

小鼠抗 His 標簽單抗100μL  RNA 級 PVP K30( 聚乙烯基烷酮 K30) 100g

小鼠抗 His 標簽單抗1000μL  RNA 級 Oligo(dT) 纖維素25mg
人Z-DNA結(jié)合蛋白1(ZBP1)elisa分析檢測試劑盒

人Wnt-3a蛋白(WNT3A)elisa分析檢測試劑盒

人v-rel禽網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞過多癥病毒癌基因同源物B(RelB)elisa分析檢測試劑盒

人vav3核苷酸交換因子(VAV3)elisa分析檢測試劑盒

人U型肌酸激酶,線粒體(CKMT1A)elisa分析檢測試劑盒
小鼠真皮毛乳頭細胞小鼠蛋白二硫化物異構(gòu)酶A4(PDIA4)elisa檢測試劑盒

小鼠蛋白激酶A(PKA)elisa檢測試劑盒

小鼠蛋白激酶A（PKA）elisa檢測試劑盒

小鼠蛋白激酶B(PKB)elisa分析檢測試劑盒

小鼠蛋白激酶B(PKB)elisa檢測試劑盒

冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。