冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí),， 以防止冰晶過(guò)大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。

產(chǎn)品屬性：

名稱    大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞
2.組織來(lái)源：腦組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞分離自腦皮層組織；大腦分左右兩個(gè)半球,，大腦皮質(zhì)（灰質(zhì)）覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分,，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì),。少突膠質(zhì)細(xì)胞分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng),，在銀浸染標(biāo)本中,，少突膠質(zhì)細(xì)胞比星狀膠質(zhì)細(xì)胞小，其突起也較小而少,，呈珠狀,，故被稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞或寡突膠質(zhì)細(xì)胞,。少突膠質(zhì)細(xì)胞（oligodendrocyte）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）的成髓鞘神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,，其發(fā)育要經(jīng)歷少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞,、前少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞,、未成熟和成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞等階段。有學(xué)者將少突膠質(zhì)細(xì)胞按其發(fā)育程度和形態(tài)分為三型,。但是,，細(xì)胞發(fā)育是一個(gè)連續(xù)的過(guò)程，其形態(tài),、表達(dá)產(chǎn)物和功能的演變沒(méi)有嚴(yán)格的界限,，因此，其分類是相對(duì)的,。這三型分別為：Ⅰ型少突膠質(zhì)細(xì)胞又稱前O2A（pre-O2A progenitor cell）。細(xì)胞呈圓形,，表面光滑，直徑約3μm,，體外混合培養(yǎng)時(shí)成簇生長(zhǎng)在星形膠質(zhì)表面,，具有很強(qiáng)的分裂增殖潛力，表達(dá)GM1,、波形蛋白和多唾液酸—神經(jīng)粘附分子（polysialic acid-neural cell adhesion molecule，PSA-NCAM）等,。Ⅱ型少突膠質(zhì)細(xì)胞胞體常有雙極或三極突起,，極少數(shù)為單極突起,，直徑約7μm,，有一定的分裂增殖能力,。體外培養(yǎng)時(shí)為雙潛能細(xì)胞,，既可分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞又可分化為Ⅱ型星形膠質(zhì),，故又稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞-Ⅱ型星形膠質(zhì)祖細(xì)胞（oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell,，O2A）,。O2A除表達(dá)GM1和波形蛋白外還表達(dá)GD3和GQ（淋巴雜交瘤株A2B5產(chǎn)生GQ的抗體）,，故常用A2B5抗體標(biāo)記O2A。Ⅲ型少突膠質(zhì)細(xì)胞不再具有分裂增殖能力,，為分裂終期細(xì)胞,。直徑約10μm。根據(jù)其形成髓鞘的能力,，又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質(zhì)細(xì)胞,。不成熟的OL胞體常伸出4～5條較粗大突起,，表面還殘留有A2B5標(biāo)記物,，同時(shí)也表達(dá)O1-O4抗原，無(wú)形成髓鞘的能力,。成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞突起有如蜘蛛網(wǎng),，大量表達(dá)半乳糖腦苷脂（galactocerebro side,，GC）,、蛋白脂蛋白（proteio lipid protein，PLP）,、髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein,，MBP）等，有對(duì)軸突髓鞘化的能力,。體外培養(yǎng)的少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞（簡(jiǎn)稱少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞）包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞,，前兩者具有增殖能力,。

5.方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞采用消化、混合細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)缺失培養(yǎng),、搖床振蕩結(jié)合差速貼壁法并通過(guò)專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶

6.質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞經(jīng)A2B5免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27、PDGF,、bFGF,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次,；

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 雙極,、多極形

傳代特性 不傳代,，不增殖,，存活1-2周

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2,，5%

培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí),。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱,，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
土壤 DNAout30 次  小膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子5mL

土壤 DNAout100 次  小 RNA 克隆試劑盒10 次

柱式土壤 DNAout50 次  硝酸纖維素膜,，13×20cm1張

大提柱式土壤 DNAout4次  硝酸纖維素膜,，13×20cm1張

柱式水樣 DNAout50 次  消解酶 ( 溶細(xì)胞酶 ) 干粉100mg
人Stathmin 1(STMN1)elisa檢測(cè)試劑盒

人STAT3蛋白抑制分子(PIAS3)elisa檢測(cè)試劑盒

人Spondin-2 elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)

人SPARC相關(guān)模塊化鈣結(jié)合蛋白2(SMOC2)elisa檢測(cè)試劑盒

人SPARC相關(guān)模塊化鈣結(jié)合蛋白1(SMOC1)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞小鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)elisa分析檢測(cè)試劑盒

小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)

小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)elisa分析檢測(cè)試劑盒
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1,、無(wú)菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。