冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品屬性：

名稱    大鼠牙胚細(xì)胞
2.組織來源：牙胚組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

大鼠牙胚細(xì)胞分離自牙胚組織,；牙胚是牙齒開始發(fā)育階段的形態(tài)，是由牙板向深層的結(jié)締組織內(nèi)伸延,，在其末端細(xì)胞增生,，進(jìn)一步發(fā)育成牙胚。牙胚有三部分組成：①成釉器（enamel organ）,，起源于口腔外胚層,，形成釉質(zhì)；②牙乳頭（dental papilla）,，起源于外胚層間充質(zhì),，形成牙髓和牙本質(zhì)；③牙囊（dental sac）,，起源于外胚層間充質(zhì),，形成牙骨質(zhì)、牙周膜和固有牙槽骨,。牙胚的發(fā)生是口腔上皮和外胚間充質(zhì)相互作用的結(jié)果,。在胚胎的第5周，覆蓋在原口腔的上皮由兩層細(xì)胞組成,，外層是扁平上皮細(xì)胞,，內(nèi)層為矮柱狀的基底細(xì)胞。在未來的牙槽突區(qū),，深層的外胚層間充組織誘導(dǎo)上皮增生,，開始僅在上下頜弓的特定點(diǎn)上，上皮局部增生,，很快增厚的上皮相互連接,，依照頜骨的外形形成一馬蹄形上皮帶，稱為原發(fā)性上皮帶,。在胚胎的第7周,，這一上皮帶繼續(xù)向深層生長，并分裂為兩個：向頰（唇）方向生長的上皮板稱前庭板,，位于舌（腭）側(cè)的上皮板稱為牙板（dental lamina）,。在胚胎的第8~10周,，前庭板繼續(xù)向深層生長，與發(fā)育的牙槽嵴分開,，前庭板表面上皮變性,，形成口腔前庭溝。

5.方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠牙胚細(xì)胞采用膠原酶消化法制備而來制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠牙胚細(xì)胞經(jīng)檢測，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形,、多角形

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
土白蟻叢毛單胞菌   刺孢小單孢菌絳紅變種

痢疾志賀菌CMCC51252凍干粉南京便診   日本根霉

銅綠假單孢菌   禾旋孢腔菌 Cochliobolus sativus

蛾微桿菌   龍舌蘭刺盤孢 Colletotrichum agaves

蘇云金芽胞桿菌蠟螟亞種Bacillusthuringiensissubsp.galleriae   木槿刺盤孢 Colletotrichum hibisci
人SAA/LDL復(fù)合物 elisa分析檢測試劑盒

人S100鈣結(jié)合蛋白P(S100P)elisa分析檢測試劑盒

人S100鈣結(jié)合蛋白A9/鈣粒蛋白B(S100A9)elisa分析檢測試劑盒

人S100鈣結(jié)合蛋白A8/鈣粒蛋白A(S100A8)elisa分析檢測試劑盒

人S100鈣結(jié)合蛋白A8/A9復(fù)合物(S100A8/A9)elisa分析檢測試劑盒
大鼠牙胚細(xì)胞小鼠雌激素(E)elisa分析檢測試劑盒

小鼠雌激素(E)elisa檢測試劑盒

小鼠雌激素硫酸轉(zhuǎn)移酶(SULT1E1)elisa分析檢測試劑盒

小鼠雌激素硫酸轉(zhuǎn)移酶(SULT1E1)elisa檢測試劑盒

小鼠雌激素受體α(ERα)elisa檢測試劑盒
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。