產(chǎn)品屬性：

名稱    大鼠胚胎干細(xì)胞
2.組織來(lái)源：囊胚

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠胚胎干細(xì)胞分離自囊胚胚胎組織,；胚胎干細(xì)胞（Embryonic stem cell,，ESCs，簡(jiǎn)稱ES,、EK或ESC細(xì)胞）是早期胚胎（原腸胚期之前）或原始性腺中分離出來(lái)的一類細(xì)胞,，它具有體外培養(yǎng)無(wú)限增殖、自我更新和多向分化的特性,。無(wú)論在體外還是體內(nèi)環(huán)境,，ES細(xì)胞都能被誘導(dǎo)分化為機(jī)體幾乎所有的細(xì)胞類型。進(jìn)一步說(shuō),，胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）是一種高度未分化細(xì)胞,。它具有發(fā)育的全能性，能分化出成體動(dòng)物的所有組織和器官,，包括生殖細(xì)胞,。ES細(xì)胞具有與早期胚胎細(xì)胞相似的形態(tài)結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核大,，有一個(gè)或幾個(gè)核仁,，胞核中多為常染色質(zhì)，胞質(zhì)胞漿少,，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,。體外培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞排列緊密,，呈集落狀生長(zhǎng),。用堿性磷酸酶染色，ES細(xì)胞呈棕紅色,，而周圍的成纖維細(xì)胞呈淡黃色,。細(xì)胞克隆和周圍存在明顯界限，形成的克隆細(xì)胞彼此界限不清,，細(xì)胞表面有折光較強(qiáng)的脂狀小滴,。細(xì)胞克隆形態(tài)多樣,，多數(shù)呈島狀或巢狀。小鼠ES細(xì)胞的直徑7 微米～18 微米,，豬,、牛、羊ES細(xì)胞的顏色較深,，直徑12 微米～18 微米,。胚胎干細(xì)胞與普通細(xì)胞有顯著差別，有其特定的生長(zhǎng)特性和特定的標(biāo)志,，例如堿性磷酸酶活性非常高,，帶有胚胎階段特異性表面抗原（ Stage- specific embryonic antigens,SSEA），人類胚胎干細(xì)胞還帶有高分子量的糖蛋白TRA1-60,、TRA-1-81等標(biāo)志,，這些特性和標(biāo)志均可以用于對(duì)胚胎干細(xì)胞進(jìn)行鑒定，除此之外,，胚胎干細(xì)胞還可以在體外傳代,，并保持正常核型。在體外培養(yǎng)體系中加入分化抑制劑如白血病抑制因子（ Leukaemia inhibitory factor,LF）或者在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層（MEF）上培養(yǎng)時(shí),，胚胎干細(xì)胞都能呈克隆性增殖,，長(zhǎng)期保持核型正常和穩(wěn)定，凍存解凍也不影響不分化的特性,。另外,，胚胎干細(xì)胞還表現(xiàn)岀高水平端粒酶活性，目前證明端粒酶與細(xì)胞衰老密切相關(guān),，多數(shù)成熟細(xì)胞的端粒酶活性都很低,。這些都是胚胎干細(xì)胞與成熟細(xì)胞不同的重要特點(diǎn)，也可能是其復(fù)制生命期限遠(yuǎn)比體細(xì)胞長(zhǎng)的原因,。

5.方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胚胎干細(xì)胞采用分離囊胚組織,，去除胚胎透明帶、使用特制專用培養(yǎng)基篩選培養(yǎng),，消化傳代純化制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胚胎干細(xì)胞經(jīng)Oct-4免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含LIF,、BMP,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次；

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 短梭形,、多角形

傳代特性 可傳5-8代左右

消化液 0.025%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí),。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1,、無(wú)菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
無(wú)乳鏈球菌   香蕉枯萎病

白色葡萄球菌   白淺灰鏈霉菌

茯苓   多形魯氏酵母

產(chǎn)黃纖維單胞菌   地衣芽孢桿菌

灰色鏈霉菌   胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA)70mm
人β甘露糖苷酶(β Manase)elisa檢測(cè)試劑盒

人β-防御素3 elisa檢測(cè)試劑盒

人β-防御素2 elisa檢測(cè)試劑盒

人β防御素104(DEFB104A)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)

人β-防御素1(DEFB1)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠胚胎干細(xì)胞小鼠二氫嘧啶脫氫酶(DPYD)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠二氫乳清酸脫氫酶(DHODH)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠二肽基肽酶4(DPP4)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠二肽基肽酶-4(DPP4)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠二肽基肽酶4(DPP4/CD26)elisa檢測(cè)試劑盒