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參考價(jià)	面議

產(chǎn)品簡介

供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號	GOY-01X1409	應(yīng)用領(lǐng)域	化工
主要用途	僅供科研使用

大鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞公司其它各種產(chǎn)品超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒
超氧化物歧化酶（SOD）測試盒
過氧化氫酶（CAT）試劑盒
過氧化氫酶（CAT）測試盒
過氧化物酶（POD）試劑盒

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	大鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號	GOY-01X1409

名稱 大鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞
2.組織來源：三叉神經(jīng)組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

大鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞分離自三叉神經(jīng)組織；三叉神經(jīng)為粗大的混合性腦神經(jīng),，含一般軀體感覺和特殊內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)兩種纖維,。其特殊內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)纖維起于腦橋中段的三叉神經(jīng)運(yùn)動(dòng)核,，纖維組成三叉神經(jīng)運(yùn)動(dòng)根,，由腦橋基底部與腦橋臂交界處出腦,，位于感覺根下內(nèi)側(cè),，后進(jìn)入三叉神經(jīng)第3支下頜神經(jīng)中,，經(jīng)卵圓孔出顱,，隨下頜神經(jīng)分支分布于咀嚼肌等。運(yùn)動(dòng)根內(nèi)還含有三叉神經(jīng)中腦核有關(guān)的纖維,，主要傳導(dǎo)咀嚼肌的本體感覺,。三叉神經(jīng)內(nèi)以軀體感覺神經(jīng)纖維為主，這些纖維的細(xì)胞體位于三叉神經(jīng)節(jié)（半月節(jié)）內(nèi),，該神經(jīng)節(jié)位于顱中窩顴骨巖部的前面三叉神經(jīng)壓跡處,，為硬腦膜形成的美克爾腔包裹。三叉神經(jīng)節(jié)由假單極神經(jīng)元組成,，其中樞突集中構(gòu)成了粗大的三叉神經(jīng)感覺根,，由腦橋基底部與腦橋臂交界處入腦，止于三叉神經(jīng)諸感覺核,，其中傳導(dǎo)痛溫覺的纖維主要終止于三叉神經(jīng)脊束核,；傳導(dǎo)觸覺的纖維主要終止于三叉神經(jīng)腦橋核。三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的周圍突組成三叉神經(jīng)三大分支,，即第1支眼神經(jīng),、第2支上頜神經(jīng)、第3支為下頜神經(jīng),。從3大分支不斷分支分布于面部皮膚,、眼及眶內(nèi)、口腔,、鼻腔,、鼻旁竇的粘膜、牙,、腦膜等,，傳導(dǎo)痛、溫,、觸等多種感覺。

5.方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞采用消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng),、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基含B-27 Supplement,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài) 神經(jīng)元細(xì)胞樣

傳代特性屬于終末分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,，再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)，以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓脫落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和 DMSO,，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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