名稱    小鼠胚胎干細(xì)胞
2.組織來(lái)源：囊胚

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠胚胎干細(xì)胞分離自囊胚胚胎組織,；胚胎干細(xì)胞（Embryonic stem cell,，ESCs,，簡(jiǎn)稱ES,、EK或ESC細(xì)胞）是早期胚胎（原腸胚期之前）或原始性腺中分離出來(lái)的一類細(xì)胞,，它具有體外培養(yǎng)無(wú)限增殖,、自我更新和多向分化的特性。無(wú)論在體外還是體內(nèi)環(huán)境,，ES細(xì)胞都能被誘導(dǎo)分化為機(jī)體幾乎所有的細(xì)胞類型,。進(jìn)一步說(shuō)，胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）是一種高度未分化細(xì)胞,。它具有發(fā)育的全能性,，能分化出成體動(dòng)物的所有組織和器官，包括生殖細(xì)胞,。ES細(xì)胞具有與早期胚胎細(xì)胞相似的形態(tài)結(jié)構(gòu),，細(xì)胞核大，有一個(gè)或幾個(gè)核仁,，胞核中多為常染色質(zhì),，胞質(zhì)胞漿少，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,。體外培養(yǎng)時(shí),，細(xì)胞排列緊密，呈集落狀生長(zhǎng),。用堿性磷酸酶染色,，ES細(xì)胞呈棕紅色，而周圍的成纖維細(xì)胞呈淡黃色,。細(xì)胞克隆和周圍存在明顯界限,，形成的克隆細(xì)胞彼此界限不清，細(xì)胞表面有折光較強(qiáng)的脂狀小滴,。細(xì)胞克隆形態(tài)多樣,，多數(shù)呈島狀或巢狀。小鼠ES細(xì)胞的直徑7 微米～18 微米,，豬,、牛、羊ES細(xì)胞的顏色較深,，直徑12 微米～18 微米,。胚胎干細(xì)胞與普通細(xì)胞有顯著差別，有其特定的生長(zhǎng)特性和特定的標(biāo)志，例如堿性磷酸酶活性非常高,，帶有胚胎階段特異性表面抗原（ Stage- specific embryonic antigens,SSEA）,，人類胚胎干細(xì)胞還帶有高分子量的糖蛋白TRA1-60、TRA-1-81等標(biāo)志,，這些特性和標(biāo)志均可以用于對(duì)胚胎干細(xì)胞進(jìn)行鑒定,，除此之外，胚胎干細(xì)胞還可以在體外傳代,，并保持正常核型,。在體外培養(yǎng)體系中加入分化抑制劑如白血病抑制因子（ Leukaemia inhibitory factor,LF）或者在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層（MEF）上培養(yǎng)時(shí)，胚胎干細(xì)胞都能呈克隆性增殖,，長(zhǎng)期保持核型正常和穩(wěn)定,，凍存解凍也不影響不分化的特性。另外,，胚胎干細(xì)胞還表現(xiàn)岀高水平端粒酶活性,，目前證明端粒酶與細(xì)胞衰老密切相關(guān)，多數(shù)成熟細(xì)胞的端粒酶活性都很低,。這些都是胚胎干細(xì)胞與成熟細(xì)胞不同的重要特點(diǎn),，也可能是其復(fù)制生命期限遠(yuǎn)比體細(xì)胞長(zhǎng)的原因。

5.方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胚胎干細(xì)胞采用分離囊胚組織,，去除胚胎透明帶,、使用特制專用培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)，消化傳代純化制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胚胎干細(xì)胞經(jīng)Oct-4免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含LIF,、BMP、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次,；

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 短梭形、多角形

傳代特性 可傳5-8代左右

消化液 0.025%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
我司全程提供細(xì)胞生物體、生長(zhǎng)特性,、來(lái)源,、器官,、類型,、形態(tài)、培養(yǎng)條件,、應(yīng)用,、組織、凍存條件等復(fù)蘇及凍存細(xì)胞株說(shuō)明書(shū)信息,，我們專業(yè)您的細(xì)胞系實(shí)驗(yàn),，讓您實(shí)驗(yàn)再無(wú)煩擾！產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,，包括活細(xì)胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等,。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,，同時(shí),，可以施加化學(xué)、物理,、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化,。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察,、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

使用方法：
收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作,。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒,，拆下封口膜,，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；
2) 添加0.125%胰消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右,；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化,；
3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,，放入37℃,，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞*貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO,，貨號(hào)21875-091),，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,，液氮儲(chǔ)存,。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

兔抗 His 標(biāo)簽多抗,，HRP 標(biāo)記100μL  RNase 抑制劑 ( 人源 )2500U

一站式 GST 標(biāo)記蛋白質(zhì)微量純化套裝20 次  RNA 長(zhǎng)效液1.5mL

一站式 GST 標(biāo)記蛋白質(zhì)微量純化套裝20 次  RNA 洗脫液50mL

甘肽瓊脂糖2mL  RNA 洗脫液10mL

L- 甘肽 ( 還原型 )5g  RNA 溶解液10mL
人α2抗纖溶酶(α2-AP)elisa分析檢測(cè)試劑盒

人α2巨球蛋白(α2-MG)elisa分析檢測(cè)試劑盒

人α2-HS糖蛋白(AHSG)抗體elisa分析檢測(cè)試劑盒

人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)elisa分析檢測(cè)試劑盒

人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)elisa分析檢測(cè)試劑盒
小鼠胚胎干細(xì)胞小鼠蛋白磷酸酶(PP)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠蛋白磷酸酶3調(diào)節(jié)因子亞基1(PPP3R1)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠3(PR3)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠激活受體2(PAR2)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠激活受體3(PAR3)elisa檢測(cè)試劑盒