詳細(xì)介紹
高背鯽魚(yú)尾鰭細(xì)胞,;GBJd說(shuō)明書(shū)【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱(chēng) 高背鯽魚(yú)尾鰭細(xì)胞,;GBJd說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞系來(lái)源于一高背鯽魚(yú)(滇池)的尾鰭組織,。1985年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)建立,。
培養(yǎng)條件 M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS) 15%NBS
傳代方法 1:2傳代,;7-10天一次
傳代情況 P8
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類(lèi)
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1,、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%。
2,、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3,、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存。
二,、細(xì)胞處理:
1,、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)),。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,,將剩余細(xì)胞懸起,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3,、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,,1000RPM條件下離心4分鐘,,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,,加入到凍存管中,,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,,購(gòu)買(mǎi)到貨后,,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增,、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),,100%進(jìn)口來(lái)源,,100%保證5代以?xún)?nèi),活力>95%,,無(wú)細(xì)菌,、真菌,、支原體污染,。 細(xì)胞到達(dá)客戶(hù)手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶(hù)提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基,、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,,37℃孵育,,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大,、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,,終止胰酶作用,,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液,??刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡,,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),,加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),,隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況,。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,,棄去上清,,加入新鮮的培養(yǎng)基,,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),,加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),。
馬克斯克魯維酵母 Kluyceromyces marxianus
Hepa 1-6(小鼠肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
純白鏈霉菌 Streptomyces candidus
大鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp.lactis
蘋(píng)果黑腐皮殼
小鼠畸胎瘤細(xì)胞英文名稱(chēng):Pcc4
人氣管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
嗜酸桿菌 Lactobacillus acidophilus
豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna
TSCCa(人舌鱗細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
糖丁酸梭菌 Clostridium saccharobutyricum
中慢生華癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuii
IV型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mL
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
小小鏈霉菌 Streptomyces parvullus
丹參酮IIA規(guī)格:1g/支,;98%
熱帶假絲酵母 Candida tropicalis
毛木耳 Auricularia polytricha4,4'-Diamino-2,2'-stilbenedisulfonic acid 4,4'-二氨基二乙-2,2'-二磺酸 1981/11/8
N-(2,4-DINITROPHENYL)-L-ALANINE N-(2,4-二基)-L-丙氨酸 1655-52-3
Tetramethyl-1,3-diaminopropane 四基丙 110-95-2
dibutyl 2,2'-thiobisacetate 硫代二甘酸二正丁酯 4121/12/4
2-Octanone 仲 111-13-7
(S)-N-Boc-(4-Pyridyl)alanine Boc-3-(4-吡啶基)-L-丙氨酸 37535-57-2
6-Aminoindazole 6-氨基吲唑 6967-12-0
GALLIUM(III) TRIFLUOROMETHANESULFONATE 三磺鎵 74974-60-0
Methyl 4-chloro-3-oxo-butanoate 4-乙酰乙酸酯 32807-28-6
Sanggenon C 桑根C 80651-76-9
4-Chloro-7-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazole 4--7-基-2,1,3-并氧雜惡二唑 10199-89-0
1,1'-Thiobisethane 乙硫 352-93-2
3-Ethynylthiophene 3-乙炔噻吩 67237-53-0
Calcium carbide 碳化鈣 75-20-7
Glycitin 黃豆黃苷 40246-10-4
cis-3-Hexenyl formate 酸葉醇酯 33467-73-1
Phenol 酚 108-95-2
1,4-Dibromobutane 1,4-二溴丁烷 110-52-1