SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細胞,；COS-1說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研,，不可用于臨床診斷和治療,。

細胞名稱SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細胞；COS-1說明書
形態(tài)特性  成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞源自CV-1細胞株,，經(jīng)轉(zhuǎn)染編碼野生型T抗原,、起始點缺陷突變的SV40得到；細胞中整合有SV40基因組完整早期區(qū)段的單個拷貝,。該細胞表達T抗原,，適用于需要SV40T抗原表達的載體的轉(zhuǎn)染；保留SV40溶細胞性生長的特性,；支持40℃時溫度敏感性A209病毒的復(fù)制,；支持早期區(qū)段缺失的SV40純體的復(fù)制。因含有SV40的DNA序列,，該細胞需要在2級生物安全柜中操作,。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  15%NBS
傳代方法  1：3傳代；3-4天一次
傳代情況 PN2
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體  99-110
使用權(quán)限 A類

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1,、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3,、凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存,。
二、細胞處理：
1,、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)）,。第二天換液并檢查細胞密度。
2,、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存,。懸浮細胞凍存時,，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘,，少量保存上清液（防止細胞吸走）,，加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中,，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存,。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等，購買到貨后,，由我們實驗室擴增,、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，100%進口來源,，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%,，無細菌,、真菌、支原體污染,。   細胞到達客戶手中,，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細胞在凍存前死亡,，我們公司都可以免費再向客戶提供一次,。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi),，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞,，加入適量胰酶,，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育,，每隔2~3min顯微鏡下觀察,，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,，加入新鮮培養(yǎng)基,，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞,，制成細胞懸液,。控制吹打的力度,，避免產(chǎn)生大量的氣泡,，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng),，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),，1000rpm離心5min,，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基,，用吸管小心吹散沉淀,，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng)。

苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
人絨毛膜間充質(zhì)基質(zhì)細胞
大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs） Rattus
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
側(cè)孢芽胞桿菌 Bacillus laterosporus
小鼠晶狀體上皮細胞*培養(yǎng)基100mL
瓦克青霉 Penicillium waksmanii
香菇 Lentinula edodes
BGC823(人胃細胞)5×106cells/瓶×2
都柏林沙門氏菌 Salmonella dublin
根瘤菌 Rhizobium sp.
SP2∕0全細胞裂解液100μg100μg
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
香菇 Lentinula edodes
人退行性細胞英文名稱：Calu-6
T24, 人膀胱細胞 Human
異常漢遜酵母異常變種 Hansenula anomala var. anomala
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum4-Chloropyridinium chloride    4-吡啶酸    7379-35-3
N-(3-CHLOROPROPYL)PIPERIDINE HYDROCHLORIDE    N-(3-丙基)啶酸    5472-49-1
2,6-Pyridinedicarboxylic acid    2,6-吡啶二酸    499-83-2
TRIDECANOYL CHLORIDE    十三?；?nbsp;   17746-06-4
VEGETABLE STEROL    植物固醇    
4-Methylbenzophenone    4-基二    134-84-9
Methyl L-argininate dihydrochloride    L-精氨酸酯二酸    26340-89-6
PICEATANNOL    白皮杉醇    10083-24-6
9-Fluorenylmethyl chloroformate    芴氧羰酰    28920-43-6
NA    丁香蘿勒油    
4-ACETYL-4'-BROMOBIPHENYL    4-乙?；?4-溴代聯(lián)    5731/1/1
L-Fmoc-Aspartic acid alpha-tert-butyl ester    芴氧羰基-L-天冬氨酸-1-叔丁酯    129460-09-9
2-Hydroxybenzyl alcohol    水楊醇    1990/1/7
Phthalhydrazide    鄰二酰肼    1445-69-8
1-(3-HYDROXYPROPYL)-2-PYRROLIDONE    N-羥丙基-2-吡咯烷    62012-15-1
[4-(1H-Imidazol-1-yl)phenyl]methanol    4-(1H-咪唑-1-基)醇    86718-08-3
N-Boc-N'-(2-chlorobenzyloxycarbonyl)-L-lysine    N-叔丁氧羰基-N'-(2-芐氧羰基)-L-賴氨酸    54613-99-9
Glutaric acid dimethyl ester    二酸二酯    1119-40-0
Diphenylcarbamyl chloride    二氨基酰    1983/1/2
Sodium 2-propylpentanoate    丙酸    1069-66-5
Eupalinolide B    野馬追內(nèi)酯B    877822-40-7
CYCLURON    環(huán)莠隆    2163-69-1
AMMONIUM TUNGSTATE 99.99%    鎢酸銨    11140-77-5