牦牛皮膚細(xì)胞,；BMU-S1說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療,。

細(xì)胞名稱 牦牛皮膚細(xì)胞,；BMU-S1說明書
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細(xì)胞系來源于一雄性黑牦牛的皮膚組織。1996年由中國科學(xué)院昆明細(xì)胞庫建立,。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  15%NBS
傳代方法  1：2傳代,；3-4天一次
傳代情況 P4
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),，90%,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%。
2,、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3,、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。
二,、細(xì)胞處理：
1,、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細(xì)胞懸起,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集,，1000RPM條件下離心4分鐘,，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基,，加入到凍存管中,，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC,、ECACC,、DSMZ,、JCRB等,，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增,、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi),，活力>95%,，無細(xì)菌、真菌,、支原體污染,。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基,、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,，加少量PBS潤洗細(xì)胞,，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,，37℃孵育,，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大,、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶,，終止胰酶作用,，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液,?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡,，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng),，隔天觀察貼壁生長情況,。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min,，棄去上清,，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀,，制成細(xì)胞懸液,，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng),。

YEB Agrobacterium Growth Medium    BR    國產(chǎn)/進(jìn)口    100克    
人非小細(xì)胞肺細(xì)胞    英文名稱：        NCI-H358    
酵母粉葡萄糖氯霉素瓊脂/YGC瓊脂/YGC Agar    食品中霉素及酵母菌總數(shù)測定    國產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
大鼠牙細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
葡萄糖瓊脂/Dextrose Agar    腸桿菌科的葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)    國產(chǎn)/進(jìn)口    250克   刺毛鼠肺成纖維樣細(xì)胞    英文名稱：        CWbRL    
亞碲酸鹽卵黃增菌液/Egg-Yolk lurite Emulsion    金黃色葡萄球菌的選擇性分離,；貝爾德-帕克基礎(chǔ)配套試劑    國產(chǎn)/進(jìn)口    50毫升    
SK-MES-1(人肺鱗細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
NCI-H524(人非小細(xì)胞肺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
LS 180(人結(jié)腸腺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14)    5×106cells/瓶×2            1個    冰袋    
1個    熒光尺    
乙酰丁香酮    CAS2478-38-8    1g
無脊椎動物種屬鑒定 PCR Mix    131128H-100    100 次
10mL    X-Gal 溶液，20mg/mL    
10g    甘氨酸二肽    
250mg    新生    
10 次    百萬堿基植物 DNAout     
秋水仙素    CAS64-86-8    100mg
BL21-CodonPlus-RIL 種    12-119    1mL
5mL    雪旺細(xì)胞生長因子    
10000U    核糖核酸酶 RNase If    
25mg    熒光胺    
10 次    ConA 糖蛋白分離試劑盒    
葡萄糖氧化酶    CAS9001-37-0    10Ku
穿刺培養(yǎng)基    100826-10    10 管
50 次    一站式柱式 miRNAout    
100mL    交聯(lián)瓊脂糖凝膠 2B    
25g    L- 亮氨酸    
60μL    驢抗山羊 IgG,，辣根過氧化物酶標(biāo)記    
萘啶酮酸    CAS389-08-2    5g
小鼠抗 GST 標(biāo)簽單抗    130577-1000    1000μL
K-562(人慢性骨髓性白血病細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
Hela, 人宮頸細(xì)胞系                
中性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)    10mL            
CFPAC-1(人胰腺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
小鼠甲狀腺上細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
5637(人膀胱細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2