荷斯坦奶牛胎兒成纖維細胞；Human Cell line 1D3說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研,，不可用于臨床診斷和治療,。

細胞名稱 荷斯坦奶牛胎兒成纖維細胞；Human Cell line 1D3說明書
形態(tài)特性  成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞屬專利保藏,，其特征特性尚未公開,。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C4
凍存條件  基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權限 未定

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1,、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),，90%；優(yōu)質胎牛血清,，10%,。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現用現配。液氮儲存,。
二,、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)）,。第二天換液并檢查細胞密度。
2,、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二：可選擇半數換液方式,，棄去半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存,。懸浮細胞凍存時,，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘,，少量保存上清液（防止細胞吸走）,，加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中,，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存,。
質量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等，購買到貨后,，由我們實驗室擴增,、凍存，凍存的產品全部經過QC檢測,，100%進口來源,，100%保證5代以內，活力>95%,，無細菌,、真菌、支原體污染,。   細胞到達客戶手中,，1個月內出現任何問題，導致細胞在凍存前死亡,，我們公司都可以免費再向客戶提供一次,。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基,、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養(yǎng)液,，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶,，使胰酶的量能蓋住細胞,，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察,，待貼壁細胞間間隙變大,、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基,，晃動細胞瓶,，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞,，制成細胞懸液,。控制吹打的力度,，避免產生大量的氣泡,，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng),，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內,，1000rpm離心5min,，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基,，用吸管小心吹散沉淀,，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng)。

Dami(人巨核細胞白血病細胞)    5×106cells/瓶×2            
小鼠膚成纖維樣細胞    英文名稱：        MouseS    
Acc-2(人涎腺腺樣囊性細胞)    5×106cells/瓶×2            
透明質酸酶(含10mL酶解緩沖液)    1mL            
3.5% NaC1葡萄糖磷酸鹽胨水發(fā)酵管    BR    國產/進口    20支    
人腎細胞    英文名稱：        Ketr-3    
O157顯色培養(yǎng)基配套平皿/大腸桿菌O157顯色培養(yǎng)基配套平皿/O157 Chromogenic Medium Dish        國產/進口    9㎝/塊    
人間充質干細胞-臍帶                
副溶血性弧菌增菌液    副溶血性弧菌的增菌培養(yǎng)    國產/進口    250克    
猴胚胎腎上細胞    英文名稱：        Marc145    
馬鈴薯葡萄糖瓊脂/PDA瓊脂/Potato Dextrose Agar    霉菌分離培養(yǎng)和霉菌酵母菌計數    國產/進口    250克    
NCI-H2227(人小細胞肺細胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
人支氣管上細胞    英文名稱：        BEAS-2B    
豬膽鹽/Bile salt from pig    BR,，65%    國產/進口    25/1000克    
肺腺    英文名稱：        GLC-82    
米勒-海頓肉湯/MH肉湯/酪蛋白肉湯/水解酪蛋白肉湯/MHB    用于抗菌素藥物敏感性試驗    國產/進口    250克    
大鼠骨髓基質細胞*培養(yǎng)基    100mL            
無菌雞血清/Sterile Defidrinated Chicken Blood    BR    國產/進口    100/400毫升    
SW 982(人滑膜肉瘤細胞)    5×106cells/瓶×2 100U    膽固醇酯酶    
100 T    GSH—ST 測試盒    
丁酰膽堿酯酶    CAS9001-08-5    500U
驢抗山羊 IgG,，堿性磷酸酶標記    131148-60    60μL
柱式血液 RNAout    71202-50    50 次
10g    N ,N- 雙 (2- 羥乙基 ) 甘氨酸    
250 mL    4% 多聚甲醛 (RNA )    
5mL    平滑肌細胞生長因子    
5次    ECL 法地高雜交檢測試劑盒    
前脂肪細胞生長因子    21-0280-5     5mL
RNase-free Tris HCl,1M,pH 8.5    80918-100    100mL
100U    Pfu DNA 聚合酶    
500 次    BCA 法蛋白定量試劑盒    
20mg    L-Canavanine(iNOS 抑制劑 )    
30mL    天凈沙核酸濃縮劑    
L-Glutathione (reduced form)( 抗氧化劑 )    23-0400-1    1g
柱式植物 DNAout    60602-50    50 次
10mL    RNA  DEPC ( 焦碳酸二乙酯 )    
2 μg    Cre/Lox 系統(tǒng)載體系列    
5mL    dNTP 溶液，100mM     
1個    4mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)    
熒光法死細胞檢測試劑盒    140633-1000    1000 次
氨基磁珠    130515-2    2mL