豬腎細胞,；LLC-PK1說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研,，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 豬腎細胞,；LLC-PK1說明書
形態(tài)特性  上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞源自3~4周齡的Hampshire豬腎組織,，可產(chǎn)生纖溶酶原激活物。 
培養(yǎng)條件  M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS)  3%FBS
傳代方法  1:3~1:6傳代,；2~3天1次,。
傳代情況 C6
凍存條件  基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR  -
同工酶 
染色體  32~40
使用權限 A類

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),，90%,；優(yōu)質胎牛血清，10%,。
2,、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3,、凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。
二,、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)）,。第二天換液并檢查細胞密度。
2,、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,，應將細胞收集,，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走）,，加入部分新鮮培養(yǎng)基,，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存,。
質量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC,、ECACC、DSMZ,、JCRB等,，購買到貨后，由我們實驗室擴增,、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源,，100%保證5代以內,，活力>95%，無細菌,、真菌,、支原體污染。   細胞到達客戶手中,，1個月內出現(xiàn)任何問題,，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次,。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基,、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養(yǎng)液,，加少量PBS潤洗細胞,，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞,，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察,，待貼壁細胞間間隙變大,、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基,，晃動細胞瓶,，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞,，制成細胞懸液,。控制吹打的力度,，避免產(chǎn)生大量的氣泡,，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng),，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內,，1000rpm離心5min,，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基,，用吸管小心吹散沉淀,，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng)。

dATP 溶液,，100mM    120615-0.5    0.5mL
500g    鐵氰化    
100mL    二甲基亞砜    
100 次    一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒    
10 次    小 RNA 克隆試劑盒    
3- 氨基 -9- 乙基咔唑    CAS132-32-1    5g
植物種屬鑒定 PCR Mix 11    131129K-100    100 次
50 次    細胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V-PE）    
250g    干粉型 SOB 培養(yǎng)基    
10mL    焦碳酸二乙酯    
5次    大提柱式 Ti 質粒 DNAout    
L- 半胱氨酸    CAS52-90-4    25g
HB101 種    12-47    1mL
100mL    YPDG 液體培養(yǎng)基    
1mL    環(huán)孢 A 溶液 ,10mg/mL    
10g    茚三酮    
20 次    天凈沙 SPIA 擴增試劑盒 ( 用于擴增 DNA 模板 )    
糖原Ⅲ型    CAS9005-79-2    500mg
氨芐青干粉    60101-1    1g
100mg    遺傳    
50 次    酵母 DNAout    
1g    3,3’,5,5’- 四甲基聯(lián)苯胺二鹽酸    
人大腸細胞    英文名稱：        PA319    
桔汁瓊脂/Orange Serum Agar    飲料中耐酸細菌的分離培養(yǎng)    國產(chǎn)/進口    250克    
大鼠小腸血管內細胞*培養(yǎng)基    100mL            
強化梭菌瓊脂/RCA/RCM Agar    梭菌的分離培養(yǎng)    國產(chǎn)/進口    250克    
YAC-1(小鼠淋巴瘤細胞)    5×106cells/瓶×2            
羊膽鹽/Bile salt from sheep    BR    國產(chǎn)/進口    25克    
SF767(人腦瘤細胞)    5×106cells/瓶×2            
NCI-H1688(人典型小細胞肺細胞)    5×106cells/瓶×2            
NC膜(0.22um)    30cm × 3m,，15cm x 20cm    gersion    30cm × 3m，15cm x 20cm    
A2(人腺樣囊性細胞)    5×106cells/瓶×2            
LS 180(人結腸腺細胞)    5×106cells/瓶×2            
HSC-T6(大鼠肝星形細胞)    5×106cells/瓶×2            
HCT116/人結腸細胞    株        國產(chǎn)    
植物蛋白提取試劑（帶酶抑制劑）    100次        國產(chǎn)    
Calu-3(人肺腺細胞)    5×106cells/瓶×2            
人關節(jié)軟骨細胞*培養(yǎng)基    100mL            
Hce-8693(人盲腸腺細胞(未分化))    5×106cells/瓶×2            
CLED培養(yǎng)基添加劑/CLED Medium Supplement    加入100mlC.L.E.D培養(yǎng)基中    國產(chǎn)/進口    1毫升×5支    
小細胞肺    英文名稱：        NCI-H345（懸?。?nbsp;   
C127(小鼠腺細胞)    5×106cells/瓶×2            
小鼠肝細胞    英文名稱：        H22