豬腎傳代細(xì)胞；IBRS－2說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研,，不可用于臨床診斷和治療,。

細(xì)胞名稱 豬腎傳代細(xì)胞；IBRS－2說明書
形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  IBRS-2細(xì)胞建系于1964年（Castro M de）,。IBRS-2細(xì)胞可用于很多豬病毒增殖，包括豬的嵌杯狀病毒（Porcinecaliciviruses）,、豬細(xì)小病毒（Porcine parvovirus）,、水泡性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus）、非洲豬瘟病毒（African swine fever virus）,、口蹄疫病毒（Foot-and-mouth-disease-virus）等,。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C15
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 同工酶鑒定
染色體 
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),，90%,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,。
2,、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存,。
二,、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集,，1000RPM條件下離心4分鐘,，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基,，加入到凍存管中,，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,，購(gòu)買到貨后,，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源,，100%保證5代以內(nèi),，活力>95%，無細(xì)菌,、真菌,、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中,，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次,。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基,、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶,，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大,、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶,，終止胰酶作用,，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液,?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡,，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng),，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況,。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min,，棄去上清,，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀,，制成細(xì)胞懸液,，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng),。

角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子 - 不含動(dòng)物成分    21-0190-5    5mL
RNase-free 氯化鋰溶液 ,10M    100907-100    100mL
5次    PCR 法 DNA 探針生物素標(biāo)記試劑盒     
250mL    氨基染膜液    
1g    GSH( 抗氧化劑 )    
50 次    即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒    
HDAC 抑制劑    23-0310-1    1g
紫外交聯(lián)儀    120931-1    1臺(tái)WL營(yíng)養(yǎng)瓊脂/華倫斯坦實(shí)驗(yàn)室營(yíng)養(yǎng)瓊脂/WL Nutrient Agar    啤酒和發(fā)酵產(chǎn)品中酵母菌和細(xì)菌的計(jì)數(shù)    國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
人肺成纖維細(xì)胞    英文名稱：        HFL1    
假單胞分離肉湯/Pseudomonas Isolation Broth    假單胞菌群增菌培養(yǎng)    國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
大鼠正常肝細(xì)胞    英文名稱：        BRL-3A    
葡萄球菌增菌肉湯/Staphylococcus Enrichment Broth    凝固酶陽生葡萄球菌選擇性增菌    國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
大鼠腸巨噬細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
溴甲酚紫葡萄糖肉湯/BCP Glucose Broth    用于罐食品的細(xì)菌檢驗(yàn)    國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
SK-OV-3(人卵巢細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
NCI-H2227(人小細(xì)胞肺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
OK(負(fù)鼠腎小管細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
ECV-304(人臍靜脈內(nèi)細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
MCF-7(人腺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L](小鼠成纖維    5×106cells/瓶×2            
Hep G2, 人肝細(xì)胞系                
5637(人膀胱細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
Citrate Buffer(100x)/檸檬酸緩沖液(IHC抗原修復(fù)液, 100x)    100ml        國(guó)產(chǎn)   小鼠結(jié)締組織纖維細(xì)胞    英文名稱：        LTK    
5mL    Tricine-SDS-PAGE 上樣液    
100 次    糞便 DNAout    
25g    多聚甲醛    
100 次    真細(xì)種屬鑒定 PCR Mix 2    
QAE 葡聚糖凝膠 A-50    CAS83382-89-2    25g
α-Actin 小鼠單抗    130566-1000    1000μL
RNase-free 水    80403-1    1mL